[发明专利]β-干扰素免疫干预类风湿关节炎的体外评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种类风湿关节炎的体外评价方法，尤其涉及一种在β-干扰素免疫干预类风湿关节炎的过程中，体外评价β-干扰素效用的方法。

背景技术

类风湿性关节炎(Rheumatoid Arthritis-RA)属于一种病因未明的以侵犯四肢关节为主的自身免疫病，其发病率高达0.4％-1％。长期以来，该病仍限于用激素或非甾体类药物的姑息治疗。新近的免疫干预新方法(抗CD20抗体、TNF-α受体拮抗剂以及抗黏附分子的抗体)显示了免疫调节和免疫干预在治疗RA中的重要作用。但值得关注的是β-干扰素(IFN-β)在治疗RA中具有潜力和前景。IFN-β是一种抗病毒、抗细菌感染和抑制细胞增殖活化的细胞因子而有别于IFN-α和IFN-γ。人们已经关注到它以特有的免疫调节特性和抗病毒的双重作用在干预自身免疫性疾病中(特别是对RA)发挥了重要的生物学功能。IFN-β可能的作用机制包括：抑制患者自身反应性CD4⁺T细胞的增殖、抑制CD8⁺T细胞、调控细胞因子产生(IL-10和IL-12)等。目前认为，促炎症的Th1细胞因子和抗炎症的Th2细胞因子之间的平衡与自身免疫病的发病过程存在着密切的关联。现已证明，在应用IFN-β治疗治疗多发性硬化症(Multiple Sclerosis，MS)中，IFN-β具有调节趋化因子的产生，降低其浓度梯度和T细胞受体CCR5表达而抑制炎性T细胞从外周向大脑中枢(CNS)迁移。在体外，已发现IFN-β还可以抑制HHV-6/EBV等病毒的复制，发挥其抗病毒的生物学效应，并明显减少RR-MS患者复发期HHV-6/EBV病毒的复制。经过IFN-β治疗的MS患者其血清中特异的抗HHV-6/EBV的IgM抗体(可以作为病毒扩增的指标)含量也有相应的下降。

发明内容

本发明的目的是提供一种β-干扰素免疫干预类风湿关节炎的体外评价方法，通过检测β-干扰素免疫干预前后的各种细胞因子、蛋白酶和配基的水平，从而建立β-干扰素免疫干预类风湿关节炎效用的体外评价方法。

本发明所述的β-干扰素免疫干预类风湿关节炎的体外评价方法，在β-干扰素免疫干预前后，分别检测T淋巴细胞抗原受体β-链可变区、CD3⁺T细胞增殖、血清中的基质金属蛋白酶和滑液中的核因子κB受体活化因子配体的水平；然后使用t检验对各项检测结果进行统计分析，在β-干扰素免疫干预后T淋巴细胞抗原受体β-链可变区、CD3⁺T细胞增殖、血清中的基质金属蛋白酶和滑液中的核因子κB受体活化因子配体的水平均同时下降，p＜0.05，具有显著性差异。

正常人外周血T淋巴细胞95％的T淋巴细胞抗原受体(T cell receptor，TCR)由α和β两条多肽链组成。β-链可变区(TCR BV)可分为保守性基因家族TCR BV1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24和25。

与正常人相比，RA患者体内的CD3⁺T细胞普遍含量较高。测定CD3⁺T细胞增殖水平也直接反应药物的效用。

基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinases，MMP)属锌依赖性内肽酶家族，能够降解一种或几种细胞外基质(Extracellular Matrix，ECM)。它与多种疾病如：心血管病和肿瘤等有关。在类风湿关节炎中，MMP-3是导致软骨降解的最重要的蛋白酶，是系统性的炎症标志物，可作为类风湿关节炎患者滑膜损伤和预后的主要指标之一。

核因子κB受体活化因子配体(Receptor Activator of NF-κB Ligand，RANKL)，也称为骨保护素受体(Osteoprotegerin Ligand，OPGL)，它主要表达于破骨细胞前体细胞表面，是参与破骨细胞分化、激活、存活和淋巴结形成的主要介质。近年来对RA软骨和骨破坏的研究证实了骨骼和免疫系统的相互作用的重要性。同时对免疫缺陷动物模型进行研究时发现，RANKL在RA骨破坏中发挥了重要作用。

本发明使用定量PCR检测TCR BV，方法简述如下：