[发明专利]组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法

权利要求书

1.一种组织工程用仿生软骨细胞外基质的制备方法，其特征在于：包括如下步 骤：

1)选取制备组织工程用仿生软骨细胞外基质的仿生原材料，按质量百分比(wt％) 由以下成分组成：

60-80的II型胶原蛋白、15-30的硫酸软骨素、5-10的透明质酸；

2)将步骤1)所述量的II型胶原蛋白、硫酸软骨素和透明质酸溶于浓度均为0.01 mol/L～0.1mol/L的醋酸、丙二酸溶剂或盐酸中并充分搅拌使其完全溶解得到 酸性溶液；

3)在20-25℃条件下，将粒径为100-150μm的水溶性制孔剂按照孔隙率设计 要求取量并加入酸性溶液后，充分搅拌使其混合均匀得到仿生原材料总质量浓 度为5％～30％的组织工程用仿生软骨细胞外基质溶液，其中，制孔剂为NaCl或 KCl晶体；

4)将步骤3)所得的组织工程用仿生软骨细胞外基质溶液注入预先制备好的用 于制作组织工程用仿生软骨细胞外基质的模具中并加压、密封；

5)将步骤4)中所述的注入酸性溶液的模具置于-10℃～-30℃环境中放置2- 4h后再置于-70℃～-90℃的环境中放置6-12h，最后再进行冻干；

6)依据胶原蛋白交联技术要求，将步骤5)中冻干的复合材料取出，浸泡于浓 度为5-10％的交联剂溶液中，每2-4h对交联剂溶液进行更换，交联24h后对复 合材料进行低温冻干得到复合基质材料，其中交联剂戊二醛、京尼平或1，4-二 (3，4-羟基苯)-2，3-二甲基丁烷；

7)将步骤6)中冻干的复合基质材料用去离子水反复漂洗至复合基质材料为中 性，得到多孔的复合基质材料；

8)将所述多孔的复合基质材料进行低温冻干，再经X-射线消毒后即可得到组 织工程用仿生软骨细胞外基质产品，所述组织工程用仿生软骨细胞外基质产品 具备如下物理结构参数：孔径：100～150μm，孔隙率60～90％，孔通率100％。