[发明专利]一种dsRNA与柴胡皂甙的药物组合及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及一种应用于养殖动物病毒性感染防治的药物以及该 组合用药物的制备及稳定性控制方法，具体涉及一种dsRNA与柴胡皂 甙的药物及其应用。

背景技术：

病毒性感染是引起养殖动物死亡、影响动物养殖经济效益的重要 因素，随着国家兽药质量标准的规范，取消了大批原地方标准的抗病 毒药物，可选用的抗病毒药物的短缺与兽医临床的需求矛盾日益突 出。

1967年，美国Merck药厂的Field等人发现了酶促合成的双链 核酸(double strained RNA，dsRNA)具有诱生干扰素的能力，其中 聚肌胞(Polyinosinic-polycytidylic Acid，PIC)的诱生能力最 强，它可以刺激机体产生广谱的内源干扰素，进而激活蛋白激酶和 2’，5’-寡聚腺苷酸合成酶、Mx蛋白等抗病毒因子，以降解进入细 胞的病毒，达到抑制、治疗病毒性感染的目的。

PIC由寡聚肌苷酸与寡聚胞苷酸在合适的条件下按碱基配对的原 则聚合而成。研究表明，PIC分子量的大小、双链的紧密程度及其稳 定性是决定其诱导干扰素活性高低的重要影响因素。目前，国内虽然 有寡聚肌苷酸及寡聚胞苷酸原料的生产，但尚缺乏对双链配对的合适 条件、稳定性影响因素等的系统研究，也未见到其与其他活性物质配 伍方面的报道。

国内外的药理学和毒理学研究表明，PIC应用于动物体后，可发 生一过性低热的副作用，而如何防止这一副作用的发生，尚未见研究 报道。

发明内容：

本发明的目的是提供一种dsRNA与柴胡皂甙的药物及其应用，它 能够诱导动物机体产生干扰素，增强机体免疫力，具有抗病毒作用的 合成核酸类化学药品与中药提取物的组合用药物，以及本组合药品稳 定性控制方法和在家禽，家畜、宠物和水产动物上的应用。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案： 它的配方组成为：柴胡皂甙含量范围：20-50μg/ml；柴胡挥发油含 量范围：紫外吸收值0.45以上；聚肌胞1-3mg/ml，分子量范围： 200-500bp(琼脂糖凝胶电泳法)；它的制备方法为：将上述组成部分 添加适当的药用辅料按水针剂生产工艺，经配液、过滤、灌封、灭菌、 检验合格后即可。这些组分之间具有一定的促效与增效作用，并且可 以避免dsRNA的副作用。

为了制成上述的复方制剂，需要对其稳定性进行控制，以确保改 组和药品适合保存运输，从而具有上述的药效。

所述的聚肌胞的合成方法为：

500ml注射用水中依次加入焦亚硫酸钠0.3g、氯化钠0.6g以及 适量的磷酸二氢钠与磷酸氢二钠，加热至20-60℃，进一步优选为 30-50℃之间的某一特定温度，加入500mg聚胞苷酸搅拌使溶解，保 温10分钟，然后加入500mg聚肌苷酸搅拌使溶解，保温配对15-30 分钟；上述溶液中加入紫外吸收值1.6以上、柴胡皂甙含量0.4％以 上的柴胡挥发油400ml，充分搅拌混匀，用注射用水定容至1000ml， 0.45um微孔滤膜法过滤，灌封，100℃流通蒸汽灭菌30分钟，灯检、 贴标即得。

所述的柴胡皂甙、柴胡挥发油的分步提取工艺为：

柴胡饮片按料液比1∶6在30-60℃，进一步优化为35-45℃之间 某一特定温度下温渍，收集相当于药材2倍量蒸馏液，减压浓缩，得 到较高紫外吸收值的柴胡挥发油；温渍后的柴胡药材，按料液比1∶ 6，加入体积百分比浓度60-98％之间，进一步优选为75-96％之间某一 特定浓度乙醇，加热至45℃，回流提取1-1.5小时提取柴胡皂甙， 提取液经浓缩，得到较高浓度的柴胡皂甙。

因为本组合药物制备过程中需要加入较高浓度的柴胡挥发油及 柴胡皂甙，而这两种成分在提取过程中存在相互影响，所以本发明采 用了兼顾两种成分的分步提取工艺。

本发明具有以下特征：通过柴胡皂甙与dsRNA的协同作用，诱导 动物机体产生内源性干扰素，阻遏病毒在动物体内的繁殖；另一方面， 通过柴胡皂甙疏散退热的功效，避免dsRNA类药物可能出现的一过性 低热的副作用。本发明涉及以下过程：二步抽提法制备柴胡皂甙和柴 胡挥发油的工艺参数；由聚肌苷酸与聚胞苷酸合成一定分子量大小并 且对核酸酶具有一定抗性的dsRNA的工艺参数；本发明的稳定化技术 及其对家禽、家畜，水产动物的药效学研究。

附图说明：