[发明专利]一种抗VEGF的单克隆抗体及含有该抗体的药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程抗体技术领域，具体涉及与血管内皮生长因子VEGF特异性结合的基因工程抗体，本发明还提供含有该抗体的药物组合物和试剂盒。

背景技术

血管内皮生长因子，vascular endothelial growth factor，简称VEGF，是血管内皮细胞特异性的肝素结合生长因子(heparin-binding growth factor)，可在体内诱导血管新生。人的VEGF蛋白于1989年由美国的科学家成功纯化与鉴定，并克隆与测定了其基因序列。

血管内皮生长因子具有促进血管生成的作用。所有VEGF家族的成员都能通过结合细胞表面的相应受体(VEGFRs)来激活细胞反应，通过磷酸作用从而二聚化并活化。血管内皮生长因子受体含有7个免疫球蛋白样的胞外结构域，一个跨膜结构域和一个含酪氨酸激酶域的胞内结构域。血管内皮生长因子A能与血管内皮生长因子受体1(受体Flt-1)和血管内皮生长因子受体-2(KDR/Flk-1)结合。血管内皮生长因子受体-2几乎介导了VEGF所有已知的细胞反应。血管内皮生长因子，它的生物活性和它的受体已经被Matsumoto等人和Marti等人详细阐述和研究(参见Angiogenesis in ischemic disease.Thromb Haemost.1999Suppl 1：44-52；VEGF receptor signal transduction Sci STKE.2001：RE21)。

VEGF是高度保守的同源二聚体糖蛋白，由两条分子量各为24kDa的单链以二硫键组成二聚体。由于mRNA不同的剪切方式，分别产生出VEGF121、VEGF145、VEGF165、VEGF185、VEGF206等至少5种蛋白形式，其中VEGF121、VEGF145、VEGF165是分泌型可溶性蛋白，能直接作用于血管内皮细胞，促进血管内皮细胞增殖和迁移，增加血管通透性。

VEGF相关疾病通常的特征为：过度的血管内皮细胞的增殖、血管通透性增加、组织水肿和炎症如由损伤、中风或肿瘤引起的脑水肿；炎症疾病引起的水肿，如银屑病或关节炎，包括类风湿性关节炎；哮喘；烧伤相关的普遍性水肿；肿瘤、炎症或外伤引起的腹水和胸腔积液；慢性气管炎；毛细血管漏综合症；败血病；蛋白质渗漏相关的肾脏疾病；眼部疾病，如老年性黄斑变性和糖尿病性视网膜病变；肿瘤，包括乳腺癌、肺癌、结直肠癌、脑胶质瘤和肾癌等。

抗体与其靶点的结合是特异性的，能够起到介导免疫效应机制的作用，并且在血清中具有较长的半衰期。这些特性使抗体具有很强的治疗应用。

目前，FDA和欧洲已批准了重组人源化鼠抗VEGF单克隆抗体AVASTIN用于治疗结直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、脑胶质瘤、肾癌和老年性黄斑变性(AMD)，2008年的销售额达到48亿美元。但是AVASTIN抗体对VEGF亲和力不高，另外由于独家生产，病人需要花费高额的费用，目前一个病人用药一年的费用约在5万至10万美元。所以，研发新的抗VEGF单克隆抗体，从而减少病人负担，降低治疗费用是一个亟待解决的问题。

定义

在进一步阐述本发明之前，我们有必要认识到，本发明并不局限于描述的特定的实施方案，也就是说，在具体形式上可能存在着变化。还有一点需要提醒的是，由于本发明的范围受附加的权利要求书的限制，因此，本文使用的术语只是为了描述特定实施方案的目的，而不是为了限制本发明的目的。

术语“抗体”和“免疫球蛋白”在本文中可以互换使用。这些术语均为本领域技术人员所熟知的术语，具体是指由能特异结合抗原的一种或多种多肽构成的蛋白质。抗体的一种形式构成了抗体的基本结构单元。这种形式是四聚物，它由两对完全相同的抗体链构成，每一对都有一个轻链和一个重链。在每对抗体链中，轻链和重链的可变区联合在一起共同负责结合抗原，而恒定区则负责抗体的效应器功能。

目前已知的免疫球蛋白多肽包括κ和λ轻链，以及α，γ(IgG₁，IgG₂，IgG₃，IgG₄)，δ，ε和μ重链或它们的其它类型等价物。全长的免疫球蛋白“轻链”(大约25kDa或大约214个氨基酸)包含一个由NH2-末端上大约110个氨基酸形成的可变区，以及一个COOH-末端上的κ或λ恒定区。全长的免疫球蛋白“重链”(大约50kDa或大约446个氨基酸)，同样包含一个可变区(大约116个氨基酸)，以及重链恒定区之一，例如γ(大约330个氨基酸)。