[发明专利]肿瘤抗原TRAG-3模拟表位肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种肿瘤抗原模拟表位肽，特别涉及肿瘤抗原TRAG-3模拟表 位肽，还涉及该模拟表位肽的应用。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的高发病率和高死亡率疾病。其治疗方法主 要包括手术切除、放射治疗和化学药物治疗，但这些方法对某些肿瘤特别是晚 期恶性肿瘤的治疗效果还不尽如人意。近年来，肿瘤免疫治疗作为恶性肿瘤的 第四种治疗方法得到迅速发展。已有大量文献报道，基于肿瘤抗原细胞毒性T 淋巴细胞(CTL)表位的肿瘤疫苗在体内可有效诱导特异性杀瘤CTL的产生， 使部分患者的病情得到控制和缓解，而对正常组织无损害。因此，肿瘤疫苗的 研制具有重要意义和良好的应用前景。

随着生物技术的发展，多种肿瘤抗原及其CTL表位被鉴定并成为肿瘤免疫 学及肿瘤疫苗发展的基础。其中，肿瘤睾丸抗原(CT)家族是一类包含多个基 因家族的肿瘤特异性共享抗原，广泛表达于多种实体瘤组织中，而在除睾丸、 胎盘外的其他正常组织不表达。因其在肿瘤组织表达的特异性和在体内激发细 胞免疫应答和体液免疫应答的有效性，CT抗原成为多种实体瘤特异性疫苗免疫 治疗的首选抗原。

泰素耐药相关基因(TRAG-3)编码的TRAG-3是由Duan等在寻找泰素耐 药基因时在泰素耐药的卵巢癌细胞株SKOVTR中发现的一个新CT抗原，在多 种恶性肿瘤如非小细胞肺癌、软骨肉瘤和黑色素瘤中高表达，而在除睾丸组织 外的其他正常组织(肝脏、肺脏、肾脏、胰腺、骨骼肌、胎盘、心脏和脑)中 不表达。发明人在前期研究中发现，TRAG-3_58-66(ILLRDAGLV)为HLA-A2.1 限制性CTL表位，该表位肽负载树突状细胞肿瘤疫苗在体外能够有效激发抗瘤 CTL免疫反应。

但是，天然表位肽存在不易被抗原递呈细胞摄取，易被肽酶降解等缺陷， 以其为基础构建的肿瘤多肽疫苗不能满足肿瘤免疫治疗的要求，必须对天然表 位肽进行改造，以增加CTL免疫应答强度和抗肽酶降解能力。近年来，运用非 天然氨基酸对生物活性肽进行化学修饰，研究其构效关系，进一步发展高效肽 类似物，已成为多肽化学研究的重要手段和方向之一。运用这种方法已得到许 多具有高活性、高选择性、半衰期长的肽类似物。因此，利用非天然氨基酸对 天然表位肽进行改造，有望获得既能激发较强CTL免疫应答，又能抗肽酶降解 的模拟表位肽。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的之一在于利用非天然氨基酸对TRAG-3天然表位 肽(TRAG-3_58-66，ILLRDAGLV)进行改造，获得既能激发较强CTL免疫应答， 又能抗肽酶降解的模拟表位肽；目的之二在于提供所得模拟表位肽的应用。

为达到上述目的，在本发明的第一方面，提供了一种TRAG-3模拟表位肽， 由Ile-Leu-Leu-Arg-Asp-Ala-Gly-Leu-Val所示的氨基酸序列组成，其中，第5位 Asp为D-Asp或者第6位Ala为D-Ala。

在本发明的第二方面，提供了所述TRAG-3模拟表位肽在制备治疗TRAG-3 阳性肿瘤的多肽疫苗中的应用。

进一步，所述TRAG-3阳性肿瘤包括非小细胞肺癌、软骨肉瘤和黑色素瘤。

本发明的有益效果在于：研究结果显示，与TRAG-3天然表位肽相比，本 发明的TRAG-3模拟表位肽具有更好的抗酶降解稳定性，与HLA-A2.1具有更强 的亲和力，并且对TRAG-3阳性肿瘤细胞表现出更强的CTL特异性杀伤效应； 因此，本发明的模拟表位肽可以用于制备治疗TRAG-3阳性肿瘤的多肽疫苗， 在肿瘤免疫治疗领域有着良好的开发应用前景。

附图说明

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发 明作进一步的详细描述，其中：

图1为TRAG-3模拟表位肽T1的空间结构模拟图；

图2为TRAG-3模拟表位肽T1与HLA-A2.1的复合物的空间结构模拟图；

图3为TRAG-3模拟表位肽T2的空间结构模拟图；

图4为TRAG-3模拟表位肽T2与HLA-A2.1的复合物的空间结构模拟图；

图5为TRAG-3模拟表位肽T1的质谱鉴定图；

图6为TRAG-3模拟表位肽T2的质谱鉴定图；

图7为TRAG-3模拟表位肽T1和T2与HLA-A2.1的亲和力检测结果图；