[发明专利]壳寡糖脂肪酸嫁接物键合阿霉素药物及制备与应用

权利要求书

1.一种壳寡糖脂肪酸嫁接物键合阿霉素前体药物的制备方法，其特征在于通过以下步骤实现：

(1)低分子量壳聚糖的制备

取市售分子量为450kDa、脱乙酰度为95％的壳聚糖50g，加至1500mL体积比1.2％的盐酸水溶液中，55℃条件下搅拌2小时，使壳聚糖充分溶涨后，缓慢加入重量比为2％的壳聚糖酶溶液，在55℃温度条件下进行壳聚糖酶解反应，以凝胶渗透色谱法控制壳聚糖的降解程度，待反应结束后，在80℃下搅拌0.5h，加入重量/体积比0.3％的活性炭，将反应液稀释后，用布氏漏斗过滤，滤液用0.45μm微孔滤膜处理，喷雾干燥得壳寡糖，所得壳寡糖的重均分子量为18.1kDa；

(2)壳寡糖硬脂酸嫁接物的合成

取上述壳寡糖800mg，加30ml蒸馏水超声溶解，另分别称取253mg的硬脂酸和1.0g的碳二亚胺SA 204.2mg，硬脂酸与碳二亚胺的摩尔比为1∶10，混合，加入20ml乙醇，水浴超声溶解，于60℃下搅拌40min，然后缓慢注射到壳寡糖水溶液中，壳寡糖与硬脂酸的摩尔比为1∶20，80℃下搅拌反应4h，冷却至室温，将终反应液置透析袋中，蒸馏水透析3天，透析液冷冻干燥后，以无水乙醇洗涤去除残留的硬脂酸，得到壳寡糖硬脂酸嫁接物；

采用三硝基苯磺酸法测定壳寡糖硬脂酸嫁接物的氨基取代度，取1～10mg不同重量的壳寡糖分别溶于2ml的蒸馏水，加入4％碳酸氢钠2ml和0.1％三硝基苯磺酸2mL，37℃下孵育2h，加入2mol/L盐酸2mL，摇匀，344nm处测定吸光度，制备标准曲线，取上述壳寡糖-硬脂酸4mg溶于2mL蒸馏水中，同法操作，按标准曲线计算壳寡糖-硬脂酸嫁接物的氨基取代度为6.47％；

(3)阿霉素碱制备：称取盐酸阿霉素200mg，溶于20ml二甲基亚砜中，加入三乙胺，盐酸阿霉素与三乙胺的摩尔比为1∶2，搅拌过夜，将反应液置透析袋中，蒸馏水透析24小时，冷冻干燥，得到阿霉素碱；

(4)阿霉素-顺乌头酸中间体制备：称取上述阿霉素碱50mg，溶于2ml吡啶中，另称取阿霉素与顺乌头酸酐的摩尔比为1∶5的顺乌头酸酐，溶于5ml二氧己烷中，缓慢滴加到阿霉素溶液中，低温下搅拌过夜，用25ml氯仿和25ml5％NaHCO₃萃取，取水层，重复两次，用盐酸调节pH至3，有沉淀析出，继续搅拌30min，10000rpm低温离心分离10min，弃去上清液，加入少量蒸馏水，离心，弃去上清液，得到的沉淀产物分散于水中，冷冻干燥，得到阿霉素-顺乌头酸中间体；

(5)目的物制备：称取壳寡糖的脱乙酰度为95％、重均分子量为18.1kDa、脂肪酸为C18、硬脂酸的氨基取代度为6.47％的壳寡糖脂肪酸嫁接物100mg，溶于200ml水中，探头超声30次，另称取1mg、5mg、20mg或50mg的阿霉素-顺乌头酸中间体，加入二甲基亚砜溶液，使中间体浓度为1mg/ml，中间体溶液缓慢滴加到嫁接物水溶液中，加入过量碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，中间体与碳二亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺摩尔比为1∶10∶10，室温下搅拌过夜，将反应液置透析袋中，二甲基亚砜水混合溶媒透析2天，蒸馏水继续透析1天，冷冻干燥，得到寡糖脂肪酸嫁接物键合阿霉素前体药物。

2.根据权利要求1所述方法制备得到的壳寡糖脂肪酸嫁接物键合阿霉素前体药物，其中壳寡糖的分子量为18.1kDa，脂肪酸的碳链长度为C18，壳寡糖的脱乙酰度为95％，壳寡糖-硬脂酸嫁接物的氨基取代度为6.47％，载体中阿霉素的重量百分含量为：0.62％、3.0％、10％或30％。

3.根据权利要求2所述的一种壳寡糖脂肪酸嫁接物键合阿霉素前体药物在制备抗肿瘤和逆转肿瘤细胞耐药性药物中的应用。