[发明专利]一种低分子肝素的基团修饰方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种抗凝血药物天然低分子肝素的基团修饰方法。

背景技术：

低分子肝素作为一种重要的抗凝血药物，是由肝素经化学法、酶法或物理法降解或分离得到的分子量在3000～8000Da的糖氨聚糖片段。与传统的肝素相比，低分子肝素具有抗血栓作用强、出血副作用小、生物利用度高、血浆半衰期长等优点，在国际市场上已开始逐渐取代肝素。

肝素主要来源于畜禽副产物中的猪小肠黏膜、牛肺等，并且我国是国际上最主要的肝素供应国，肝素钠是我国最重要的创汇产品之一，80％的粗品或精品肝素出口到美国和德国。但我国应用的低分子肝素主要依靠进口，是由国外将肝素钠再行降解形成低分子肝素后再输入到我国。目前临床上用于抗血栓的药剂主要是低分子肝素制剂，据IMS统计，2004年肝素市场的全球销售额已突破40亿美元，其中低分子肝素制剂在肝素制剂销售额的比例也逐年上升，目前递增率已达到85％以上。2004年我国低分子肝素制剂的销售额达到了3.5亿人民币。因此，不断完善从粗品原料到精品再到成品制剂完备的产业链，研究低分子肝素制备技术的提升、创新将具有重要的经济意义和社会效益。

尽管我国畜禽副产物极为丰富，但目前其综合利用、精深加工水平和技术装备落后；另外，目前天然低分子肝素的制备方法都存在着生产成本高、效率低、环境污染大、不符合药典标准、产品毒副作用大、活性低等缺陷。

发明内容：

为解决背景技术中的不足，本发明提供一种低分子肝素的基团修饰方法，应用该方法使低分子肝素的活性得到了提高。

本发明所采用的技术方案内容是：该低分子肝素的基团修饰方法以亚硝酸钠降解所得的低分子肝素为原料，按如下步骤进行基团修饰：将所述的低分子肝素添加到氯磺酸-吡啶酯化试剂中，通过不同温度、时间、酯化试剂比例反应条件控制硫酸基的取代度。

上述的温度为15℃～25℃，时间为1h～2.5h，酯化试剂与低分子肝素量比例为10∶1(体积质量比)，酯化试剂氯磺酸与吡啶的体积比为1∶1；温度为20℃，时间为2.5h。

本发明的有益效果是：经过基团修饰后的抗凝血药物天然低分子肝素使低分子肝素的活性得到了提高。并具有以下特点：(1)抗FXa强，抗F II a弱，抗血栓作用强，出血副作用小；(2)分子量小，生物利用度高，血浆半衰期长；(3)不与肝素结合蛋白结合，因此量效关系稳定，按体重给药，控制剂量，不需要进行实验室监测；(4)较少与血小板结合，不易引起血小板减少。

附图说明：

图1是反应温度对取代度的影响的关系曲线图；

图2是反应时间对取代度的影响的关系曲线图；

图3是酯化试剂比对取代度的影响的关系曲线图；

图4是硫酸基测定标准曲线图；

图5是低分子肝素标准品红外光谱图；

图6是修饰后低分子肝素红外光谱图。

具体实施方式：

下面结合实施例对本发明作进一步说明：

实施例1、反应温度是Wolfrom法中影响取代度的的重要因素，首先对反应温度的影响范围进行了单因素试验，其它两个因素反应时间和酯化试剂比例分别为2h和1∶1，试验结果见图1。由图1可知，随着反应温度的升高，取代度呈不断升高的趋势，主要是因为温度升高使各官能团更易于被取代，从而使低分子肝素的取代度提高，但取代度并不随着温度的升高不断增加，当温度超25℃时取代度反而下降，主要与低分子肝素可被硫酸基取代的官能团的数量有关。在反应温度继续升高时，反应剧烈程度增加，在添加酯化试剂过程中冒出大量的黄色三氧化硫烟雾，同时导致LMWH结构的破坏，影响其活性，故反应温度应控制在25℃以下为宜。

实施例2、在进行了反应温度对取代度的影响作用以后，继续对反应时间的影响作用进行了试验分析，反应温度为15℃，酯化试剂比为1∶1，试验水平数为五个，试验结果见图2。根据不同反应时间对取代度的影响结果及图2可知：随着反应时间的延长，取代度不断增加。但超2.5h后，取代度反而有所下降，主要与LMWH的结构有关，在LMWH主体结构中共有3个可以取代的基团，反应时间延长后已添加的硫酸基团可能被其它基团所取代，导致取代度的下降。所以时间为1h～2.5h为宜。