[发明专利]一种用于检测股骨头坏死易感的基因组合、引物、探针和用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因组合、引物、探针和用途，尤其是用于检测股骨头坏死易感性的基因组合及其特异性引物和探针及用途。

背景技术

股骨头坏死因其主要病理系股骨头血运受阻，遭受破坏而引起的头部骨质缺血，故多称为股骨头缺血性坏死或股骨头无菌性坏死。由于股骨头坏死有一个复杂的病理过程，如早期不能得到及时有效的治疗，就会使股骨头塌陷，关节间隙变窄，最后导致骨关节炎，使病人髋关节功能障碍而致残致瘫。病人在遭受生理病痛的同时，还要遭受心理创伤的煎熬，也给家庭、单位和社会增添了沉重的负担。

股骨头缺血性坏死(avascular necrosis of the femoral head ANFH)是骨科常见病，多发病，早期诊断困难，治疗效果欠佳，最终仍需人工关节置换术，给患者和社会带来巨大损失。其发病机理尚不十分清楚，但其共同特征都是血液循环障碍导致股骨头缺血坏死。由于机体对坏死区具有自然的修复能力，当新生骨细胞随新生血管向坏死区生长并形成新骨的同时，坏死骨小梁将被逐步吸收。在此过程中骨的力学性能明显减弱，正常负重即可致股骨头塌陷变形及髋关节退行性关节炎，同时出现以疼痛和活动障碍为主的临床症状群。早期的诊断和治疗是治疗ANFH的关键。随着ANFH的基因多态性的深入研究，越来越多的和ANFH相关的基因见诸报道。证实了多种基因在ANFH的发生发展中的作用，为ANFH的早期诊断和治疗提供了理论依据。

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)基因位于6号染色体p12区，其-634上C/G多态性会影响基因的表达，其产物血管内皮生长因子能特异性作用于血管内皮细胞，促进内皮细胞分裂，促进血管的生长和侧支循环建立的作用，也能促进血管内皮细胞分泌胰岛素样生长因子等生长因子，促进成骨细胞生长，其多态性会影响VEGF基因的表达，从而导致ANFH的发生。

亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR gene)位于1p36.13，由11个外显子组成，编码656个氨基酸，翻译成能够催化N5，N10-亚甲基四氢叶酸还原成N5-亚甲基四氢叶酸的蛋白质，后者为Hcy的再甲基化提供甲基供体，使其生成蛋氨酸。MTHFR基因677位存在C→T突变。该突变会导致其编码的丙氨酸(GCU)被缬氨酸(GUU)所取代，从而影响MTHFR的活性，使血浆中HCY水平升高。是同型半胱氨酸，高同型半胱氨酸血症是血栓形成的独立危险因素。

凝血因子5(coagulation factor V，FV)基因位于1q23，编码Glueek因子V蛋白，在凝血过程中位于内外源性凝血途径的交汇点，加速和促进凝血酶原的激活和凝血酶的生成。因子V在rs6025发生基因突变后称V Leiden因子。V Leiden因子是静脉血栓形成的常见的危险因素。基因突变导致深静脉血栓形成，血液高凝状态，从而导致股骨头小血管的血栓形成。

脂类代谢紊乱是导致股骨头坏死的重要机理，长期大剂量使用糖皮质激素引起体内高脂血症，脂肪分解，血中游离脂肪酸增多，从而使血管内皮损伤，胶原暴露，激活内源性凝血途径，使纤维蛋白血小板血栓形成。

对氧磷酶(pamoxonase，PON)又称芳香基二烷基磷酸酯酶，人类血清中的PON1与HDL紧密结合，形成一个八聚合体的结构，是ApoA一1的重要组成部分。PON基因位于染色体7q21.3一q22.1，含有9个外显子及8个内含子，PON基因家族至少有三个成员，分别为PON1、PON2和PON3。PON1基因产物是循环中HDL的组成部分，并且HDL的抗氧化的活性大部分取决于PON1。PON1的192Glu/Arg的改变，影响了对氧磷酶酶的活性。

载脂蛋白A(apolipoprotein A，Apo A)位于人类11号染色体长臂上约15kb的基因片段内，与Apo C3、Apo A4基因呈簇状排列。Apo A1基因转录起始点上游-75bp处有G/A多态性位点(rs670)，Apo A1基因结构的改变影响着Apo A1的分子结构、生成和向血液中释放的速率，进而影响血中Apo A1与HDL的水平。

载脂蛋白B(apolipoprotein B，Apo B)基因位于第2号染色体短臂(2p23)末端，全长43kb，由29个外显子和28个内含子组成。最大的外显子是26号外显子。位于第26号外显子的C7673T多态(rs693)靠近LDL受体结合区域，被认为与动脉粥样硬化、冠心病、心肌梗死及股骨头坏死密切相关。