[发明专利]一种乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及乳杆菌，尤其是一种乳杆菌产抗植物致 病真菌发酵液的制备方法。

背景技术

在世界范围内，农业生产每年因病虫草害造成巨大损失，其中由真菌引 起的病害占80％。长期以来，人们主要采用化学农药来控制农作物的病虫草 害以保证农作物的稳产和高产。但化学农药的大量使用，不仅给土壤、水体 和大气带来了污染，而且，农副产品中化学农药的残留，将直接危害人类的 健康及生存；同时，由于化学农药的长期、大量和反复使用，越来越多的植 物病原真菌对化学合成抗真菌剂和抗生素产生了抗性。因此，开发新型的、 天然的抗真菌剂非常必要。

乳杆菌与人类的生活关系密切，无论在食品发酵，还是在工业乳酸发酵 以及医疗保健领域，乳杆菌的菌株都被广泛应用。

我们发现乳杆菌能产生多种代谢产物，这些代谢产物不仅具有多种化学 结构，而且在农业以及食品工业上具有广泛的生物活性如较强的抗植物致病 真菌活力，为天然生物农药的开发提供了新的资源。目前，对乳杆菌产抗植 物致病真菌活性物质的发酵条件和发酵物应用的相关技术和方法的文献或专 利未见报道。

发明内容：

本发明的目的是针对乳杆菌(Latobacillus)产抗真菌活性物质的属性， 分别以四种乳杆菌为出发菌株，提供上述乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的 制备方法。

本发明实现目的的技术方案是：

一种乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备方法，其制备方法的步骤 是：

(1)种子发酵液的制备：用MRS液体培养基将乳杆菌菌株活化1-2次后， 接种于三角瓶中，35～40℃恒温静置厌氧培养24～48h，成为种子发酵液；

(2)发酵物的制备：在装有发酵培养基和中和剂发酵罐中按照10％的体积 比接入上述种子发酵液进行发酵，培养方式为分批补料发酵培养，35～39℃ 静置厌氧培养40～60h，控制pH值在6.4～6.7，发酵结束后，即可获得发酵物；

(3)发酵液成品的制备：将发酵物过滤，去除细胞，即得到该乳杆菌的发 酵液。

而且，所述乳杆菌菌株包括如下四种，这四种乳杆菌均保藏于中国微生 物菌种保存管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，名称及保藏编号分别为： 植物乳杆菌CGMCC 1.119；干酪乳杆菌CGMCC 1.62；发酵乳杆菌CGMCC 1.2133；嗜酸乳杆菌CGMCC 1.2686。

而且，所述的MRS培养基的构成为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏 5g，吐温-80 1ml，柠檬酸三铵2g，K₂HPO₄ 2g，葡萄糖20g，乙酸钠5g， MgSO₄·7H₂O 0.1g，MnSO₄ 0.05g，水1.0L，其pH为6.4～6.7。

而且，所述的发酵培养基的构成为：豆饼粉水解液100ml，玉米浆粉 10.0g，葡萄糖6.0g，MgSO₄·7H₂O 1.0g，K₂HPO₄，MnSO₄ 50ppm，水1.0L， pH6.4～6.7。

而且，所述的豆饼粉水解液是将20.0g豆饼粉溶解于100ml水中后，加 入10mg活力单位为2×10⁵U/g的中性蛋白酶，45℃水浴1h得到的。

而且，所述的中和剂为Ca(OH)₂，是控制发酵液pH值的中和剂。

而且，所述的分批补料发酵培养方式为：每12h补加50ml 1000g/L的葡 萄糖一次。

本发明的优点和积极效果是：

1、本发明所涉及的乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备方法，工艺简 单，生产成本相对较低，能够用于批量生产。

2、本发明能够稳定地获得乳杆菌发酵物，该乳杆菌发酵液具有较高的 生物量和抗植物致病真菌活性，可用于制备防治植物真菌病害杀菌剂，为天 然生物农药的开发提供了新的资源。

具体实施方式

以下将本发明的内容通过下列的较优的实施例作进一步的阐述，但这些 实施例并不限制本发明的保护范围。