[发明专利]一种乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备方法

权利要求书

1.一种乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备方法，其特征在于：制 备方法的步骤是：

(1)种子发酵液的制备：用MRS液体培养基将乳杆菌菌株活化1-2次后， 接种于三角瓶中，35～40℃恒温静置厌氧培养24～48h，成为种子发酵液；

(2)发酵物的制备：在装有发酵培养基和中和剂发酵罐中按照10％的体 积比接入上述种子发酵液进行发酵，培养方式为分批补料发酵培养，35～39 ℃静置厌氧培养40～60h，控制pH值在6.4～6.7，发酵结束后，即可获得发 酵物；

(3)发酵液成品的制备：将发酵物过滤，去除细胞，即得到该乳杆菌的 发酵液；

所述的MRS培养基的构成为：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5g， 吐温-80 1ml，柠檬酸三铵2g，K₂HPO₄ 2g，葡萄糖20g，乙酸钠5g， MgSO₄·7H₂O 0.1g，MnSO₄ 0.05g，水1.0L，其pH为6.4～6.7；

所述的发酵培养基的构成为：豆饼粉水解液100ml，玉米浆粉10.0g， 葡萄糖6.0g，MgSO₄·7H₂O 1.0g，K₂HPO₄，MnSO₄ 50ppm，水1.0L， pH6.4～6.7；

所述的中和剂为Ca(OH)₂，是控制发酵液pH值的中和剂。

2.根据权利要求1所述的一种乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备 方法，其特征在于：所述乳杆菌菌株包括如下四种，这四种乳杆菌均保藏 于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，名称及保 藏编号分别为：植物乳杆菌CGMCC 1.119；干酪乳杆菌CGMCC 1.62；发 酵乳杆菌CGMCC 1.2133；嗜酸乳杆菌CGMCC 1.2686。

3.根据权利要求1所述的一种乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备 方法，其特征在于：所述的豆饼粉水解液是将20.0g豆饼粉溶解于100ml 水中后，加入10mg活力单位为2×10⁵U/g的中性蛋白酶，45℃水浴1h得 到的。

4.根据权利要求1所述的一种乳杆菌产抗植物致病真菌发酵液的制备 方法，其特征在于：所述的分批补料发酵培养方式为：每12h补加50ml 1000g/L的葡萄糖一次。