[发明专利]一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

乳腺癌是一种严重危害妇女健康的恶性肿瘤，近年来发病率稳定上升且趋年轻化，发病率在女性肿瘤中居第三位。据世界范围统计，全球每年约有120多万人患乳腺癌，每年死于乳癌人数20万，工业发达国家乳腺癌进一步增加，根据美国癌症协会(ACS)的报告，美国每年超过20万人接受乳癌治疗，其中约四万人被夺去生命。从2006中国乳腺癌内分泌治疗高峰论坛上了解到，中国是乳腺癌发病率增长最快的国家之一，我国每年有约20万名妇女患乳腺癌，中国乳腺癌发病率每年约增长3％；在京、津、沪等大中城市，乳腺癌已跃居女性恶性肿瘤之首。研究显示，乳腺癌发病与家族遗传有密切关系，特别是犹太人妇女有一种特殊的BRCA1基因变异与家族性乳癌密切相关，家族遗传导致的乳癌大约占所有病例的5％-10，有乳癌家族史同时有BRCA1基因变异的妇女，她们一生中有85％机率患乳癌，而且有50％的机率患妊巢癌。同时发现，BRCA1基因无变异的大部分妇女患乳癌，各国乳癌的发病率都在升高。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，据资料统计，发病率占全身各种恶性肿瘤的7-10％，在妇女仅次于子宫癌。它的发病常与遗传有关，以及40-60岁之间，绝经期前后的妇女发病率较高。仅约1-2％的乳腺患者是男性。通常发生在乳房腺上皮组织的恶性肿瘤。是一种严重影响妇女身心健康甚至危及生命的最常见的恶性肿瘤之一。

乳腺癌从癌前变到形成癌症，需要几年时间，如何做到早期检测、诊断、预后的检测及诊治后的复发、转移早期检出是降低发病率和死亡率的关键。

HER2/neu是由癌基因ErbB2/neu编码的具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白，分子量为185ku，属表皮生长因子受体(epidermal growth factorreceptor，EGFR)家族，具有自动磷酸化作用.乳腺癌、非小细胞肺癌(nonsmall celllung cancer，NSCLC)等恶性肿瘤存在HER2/neu过表达，与肿瘤的发生、转移、血管形成及化疗耐药等有关。大量的研究文献报道，在多数癌症(卵巢癌、乳癌、肺癌、肾癌、结肠癌、胃癌等)，常有HER2/neu基因大量表达的现象。HER2/neu大量表现的癌症常伴随着较强的转移能力、血管新生能力、抗药性及较差治愈率等特性，因此HER2/neu成为癌症诊断和治疗上一个重要的标的。特别是乳腺癌，约有15-40％的病人HER2/neu基因表达增高。

(随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。本发明采用核酸原位杂交技术检测HER2/NEU基因，对乳癌的早期基因水平的预测有非常重要的临床意义。HER2/NEU  序列号：NM-001005862，4816BP，17q21.1″，cds：521….4198bp。

本发明的原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种HER2/NEU基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种HER2/NEU基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测乳腺癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。