[发明专利]一种CXCR4基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种CXCR4基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

2005年美国卫生研究院、癌症研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度报告，“认为人类在抗癌大战中是失败”，也就是说癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：1、肿瘤细胞异质性；2、肿瘤细胞耐药性；3、抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有诊治癌症的措施。本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因是：1、不能做到真正的早期诊断；2、转移的病理机制不清楚。依照传统的医学影像及和其它生化(如蛋白标记物)指标来诊断癌症，认为占位性癌块在2公分下是属于早期癌症的诊断(更小些有时无症状体征)，这一临床概念值得认真讨论。影像医学的2公分以下癌块属早期这一界定科学性是不够严谨的，从细胞学角度，1公分的肿块约有一亿个肿瘤细胞，2公分的肿块其三维空间的细胞叠加数远不止2亿个肿瘤细胞，从癌变前期到单克隆癌细胞产生及形成2公分的癌块，其病理演变过程相当长，可能是一年或两年、甚至三年以上，很难证实的是在这个过程中，肿块是癌症唯一的发生地和单独的病灶。临床上已证实：一旦形成肿块的同时，其他癌细胞通过不同途径迁移到其他部位克隆生长；一旦切除原发灶后，其他器官复发灶或多发癌块灶先后形成或转移。因此，在临床上以2公分以下的肿块大小来界定早期与否，不够严谨(有些病例，在发现原发病灶时，同时发现转移病灶，不在我们表述的内容中)，这时已经是晚期了，这是导致癌症死亡率不降的真正原因。

化学激活受体CXCR4，即chemokine(CXC motif)receptor 4，是化学激活间质细胞起源因子1(stromal cell derived factor-1，SDF-1)的受体。间质细胞起源因子/化学激活受体4(SDF-1/CXCR4)信号在不同免疫反应中起重要作用。实验证明，CXCR4在一些癌细胞中表达，癌细胞利用这个激活受体有效地形成转移。早期研究发现，它是淋巴瘤细胞侵犯组织所需，是淋巴瘤转移的必需条件。Zeelenberg等将SDF-1转入CT-26肠癌细胞系阻断CXCR4，发现能大大降低肠癌细胞肝、肺转移率。Kato等用免疫组化方法研究了79例手术切除的浸润型导管乳癌患者的组织标本中CXCR4的表达，其中59例呈均一弥漫表达(28例高表达，31例低表达)，另20例肿瘤呈灶性不均质表达。灶性表达者较弥漫表达者淋巴结转移率高。CXCR4表达模式与血行转移无关，在淋巴系统转移中占重要地位。CXCR4(化学激活受体)基因序列号：NM_001008540，1912bp，mRNA，2q21″，cds：305…1375bp。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。本发采用核酸原位杂交技术检测CXCR4基因，对癌细胞的淋巴道早期转移有非常重要的临床意义。

本发明的原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种CXCR4基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种CXCR4基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种CXCR4基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种CXCR4基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测癌症早期转移、复发疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示。

所述的癌症是肠癌。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。