[发明专利]一种nm23-H1基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种试剂盒，具体地说关于一种nm23-H1基因的原位杂交检测试剂盒及其检测方法和应用

【背景技术】

肝癌是我国常见恶性肿瘤之一，死亡率高，在恶性肿瘤死亡顺位中仅次于胃、食道而居第三位；在部份地区的农村中则占第二位，仅次于胃癌。我国每年死于肝癌约11万人，占全世界肝癌死亡人数的45％。起病常隐匿，多在肝病随访中或体检普查中偶然发现肝癌。此时病人既无症状，体格检查亦缺乏肿瘤本身的体征，此期称之为亚临床期。肝癌一旦出现症状，而来就诊者其病程大多已进入中晚期。

肝癌从癌前变到形成癌症，需要几年时间，如何做到早期检测、诊断、预后的检测及诊治后的复发、转移早期检出是降低发病率和死亡率的关键。

nm23-H1(nometastatic gene 23-H1)是最早发现的肿瘤转移抑制基因，位于17号染色体长臂着丝点附近。该位点被认为非常靠近p53基因位点，是许多肿瘤形成基因定位及易发生等位基因杂合性缺失的热点区域。近年来的研究发现nm23-H1基因的表达与各种肿瘤的侵袭及转移呈负相关，而且对患者的预后有重要影响。Wang等检测胃癌患者nm23-H1mRNA表达水平，结果表明，T3，T4期胃癌的nm23-H1mRNA水平较T1，T2期明显减低，有淋巴结转移组nm23-H1mRNA低于无淋巴结转移组，分化好的胃癌nm23-H1mRNA水平高于分化差的胃癌，nm23-H1mRNA水平低的患者总生存时间缩短。在肝细胞癌中，nm23-H1与肝内转移和TMF分期明显负相关，nm23-H1杂合性缺失多见于分化差和伴肝内转移或有门静脉癌栓的肝癌，是肝细胞癌一个独立的重要预后指标。

随着分子生物技术日益完善，功能基因组学，癌症基因组学等研究的深入展开，至今，我们已有可能在基因水平上做更精确的早期诊断，在癌变前期或癌细胞形成(单克隆时)就能做到早期预测诊断。

原位杂交技术(in situ hybridization)是将分子生物学与细胞化学技术结合起来，以标记的核酸分子为探针，在组织细胞原位检测特异性核酸分子的技术。其原理是使含有特异序列、经过标记的核酸单链(即探针)，在适宜条件下与组织细胞中的互补核酸单链即靶核酸发生杂交，再以放射自显影或免疫细胞化学方法对标记探针进行探测，从而在细胞原位显示特异的DNA或RNA分子。

【发明内容】

本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种nm23-H1基因的原位杂交检测试剂盒的用途。

本发明的再一的目的是，提供一种nm23-H1基因的原位杂交检测试剂盒。

本发明的另一的目的是，提供一种nm23-H1基因的原位杂交检测方法。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：

一种nm23-H1基因的原位杂交检测试剂盒在制备检测肝癌疾病药物中的应用，所述的试剂盒包括杂交探针、标记物，所述的杂交探针序列如SEQ IDNO.1所示。NM_000660，2346bp，mRNA，位于染色体19q13.1″，cds：868...2040bp。

所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示的RNA序列。

所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

所述的放射性核素选自³H、³⁵S、¹²⁵I或³²P中的一种。

所述的非放射性标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化酶或荧光素中的一种。

所述的非放射性标记物优选自地高辛。

所述的试剂盒还包括增效剂，所述的增效剂是碱性磷酸酶抗体。

为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：

一种nm23-H1基因的原位杂交检测试剂盒，包括杂交探针、标记物，其中所述的杂交探针序列如SEQ ID NO.1所示，所述的标记物选自放射性核素或非放射性标记物。

为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：

一种nm23-H1基因的原位杂交检测方法，该方法包括以下步骤：

a、将试剂盒中的杂交探针与底物中待测RNA接触，形成杂交复合体；

b、检测a步骤得到的杂交复合体。

所述的a步骤中形成杂交复合体的条件为：核酸杂交的温度为42℃；核酸杂交的时间为16-24小时，所述的底物选用血液细胞标本或组织细胞标本。