[发明专利]一种人血管内皮细胞生长抑制因子嵌合多肽及其制备方法和在靶向性抗肿瘤活性中的应用

权利要求书

1.一种人血管内皮细胞生长抑制因子的嵌合多肽，其特征在于，该嵌合 多肽是人血管内皮细胞生长抑制因子VEGI-192A与RGD-4C多肽相连接而成 的RGD-VEGI-192A嵌合重组蛋白，所述嵌合多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.根据权利要求1所述的嵌合多肽，其特征在于，其编码核苷酸序列如 SEQ ID NO：1所示。

3.一种权利要求1所述的嵌合多肽的制备方法，其特征在于，包括用如 SEQ ID NO：1所示的编码核苷酸序列构建表达载体，并将所述表达载体在宿 主细胞中诱导表达的步骤。

4.一种权利要求1所述的嵌合多肽的制备方法，其特征在于，通过RT-PCR 从人脐静脉血管内皮细胞总RNA，将ACDCRGDCFCG多肽和VEGI-192A的 N端融合，扩增得到RGD-VEGI-192A目的基因片段，使用限制性内切酶双酶 切取目的基因，连接至表达载体pET-30a中构建重组蛋白RGD-VEGI-192A表 达载体，再转化至大肠杆菌宿主菌中诱导表达，最后纯化蛋白。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述RT-PCR中使用 的上游引物和下游引物分别为：

5’-TTCCATATGGCTTGCGACTGCCGTGGTGACTGCTTCTGCGGTCAACTC ACAAAGGGCCGTCT-3’，

5’-CGCGGATCCCTATAGTAAGAAGGCTCCAAAGAAGGTT-3’，

所述上游引物和下游引物均含有5’端的Nde I限制性酶切位点以及3’端的 BamHI限制性酶切位点。

6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的大肠杆菌宿主 菌为OrigamiB。

7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的诱导方法采用 pET T7 RNA聚合酶复合自动诱导。

8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述的纯化方法采用 镍离子金属螯合亲和层析。

9.一种权利要求1所述的嵌合多肽在制备靶向性抗肿瘤药物中的应用。