[发明专利]脱细胞的网膜基质及其用途

说明书

技术领域

本发明一般地涉及用于组织修复和再生的生物基质领域。本发明涉及从网膜中提取脂肪的方法、脱细胞的网膜的制备方法以及脱细胞的网膜在组织修复和组织工程中的应用。

发明背景

细胞外基质(ECM)是结缔组织的重要结构成分。由细胞精制的ECM产生了一些微环境，这些细胞和其他细胞通过区分或保持其区分状态对这些微环境作出反应。ECM提供了细胞组织所附着的基底。

基于组织的ECM生物材料和装置用于各种医疗应用，如心脏瓣膜、猪SIS、人类皮肤和牛心包膜。然而，由于缺乏血管生成的血管轨道，脱细胞组织用作再生医学的组织工程支架的应用范围受到限制，而血管轨道对于组织长入以及种子细胞的生存能力和功能是很重要的。在脱细胞处理中保持血管轨道的高度血管化的组织总会在本领域受到青睐。

大网膜是用于覆盖腹腔内器官的最大的腹膜折叠。大网膜高度血管化，通常薄且有弹性，并总是含有一些脂肪。因此，大网膜已用于临床应用，如肠道手术、胸段食管手术、慢性非愈合性皮肤创伤、疝和骨盆底修复、膀胱修复等。

由于脱细胞的网膜的血管腔可以用作新生血管的轨道，因此网膜是临床应用理想的材料。然而，使用本领域已知的将哺乳动物软组织脱细胞的方法和步骤难以去除网膜内的脂肪。因此，将脱细胞的网膜用作生物基质(包括作为基于组织的ECM生物材料)的有效利用受到限制，其部分原因在于凭借本领域所说的组织再生的过程和方法不能有效地从网膜中提取脂肪。

发明内容

本发明涉及从网膜中提取脂肪的方法、制备脱细胞的网膜的方法以及经处理的脱细胞的网膜基质的医疗应用。在一个方面，一种将网膜脱细胞的方法涉及如下步骤：(1)从网膜中提取脂肪，(2)从网膜中除去会引起免疫反应或移植排斥反应的细胞，(3)消毒和(4)最终杀菌。

本发明的一些方面是从网膜中提取脂肪的一些方法，所述方法可用于本文描述的脱细胞处理中以及作为灭活处理的其它脱细胞处理中。在一实施例中，脂肪提取的方法包括：用一种或多种脱水溶剂(例如，诸如醇之类的低分子量的有机溶剂)将网膜脱水，然后使用选自非极性溶剂、极性溶剂或它们的组合的一种或多种提取溶剂来提取脂肪。脱脂后，可将网膜再水化。在本发明的一些方法中，全部和/或基本全部的脂肪被从网膜中提取。

脱细胞的网膜可“照原样”使用。此外，脱细胞的网膜可以用于其他方面，例如，被制成与细胞、组织糜、生物活性物质和其他组织工程支架结合的用于组织工程和再生医学的膜、多孔三维支架、微粒和管状结构。由于升高的组织因子(TF)浓度，网膜隔膜还具有止血性能。因此，脱细胞的网膜可用作止血剂。

对于许多应用，网膜比其它基于组织的ECM生物材料和装置(如皮肤)更受欢迎。网膜具有本文所述的脂肪提取方法和脱细胞处理中保存的许多血管腔。这些血管腔可充当新血管形成的轨道。本发明旨在应对从网膜中有效提取脂肪的问题。有效地从网膜中提取脂肪的能力促进了网膜作为生物基质的使用。

本说明书和权利要求书中所述的所有份数和百分比按重量计，除非另有规定。

附图说明

图1是根据本发明一实施例的脱细胞处理的流程图。

图2是脱细胞前后的网膜图像。

图3示出了脱细胞前后的网膜的组织图。

具体实施方式

本发明涉及脱细胞的网膜的制备方法，即，网膜的灭活或脱细胞化，所述网膜包括植入哺乳动物的细胞外基质。所述方法通常包括如下步骤：组织(特别是网膜)的脱脂和脱细胞化。本发明的一个方面涉及网膜脱脂的方法。

本发明旨在进行的脱脂是指提取组织中的脂质部分。本发明旨在进行的脱细胞化或灭活是指去除分离的器官或器官的一部分中的细胞组分而不显著损坏细胞外基质。文中，术语“脱细胞的”或“脱细胞化”以及“灭活的”或“灭活”可互换使用。灭活的组织基本上没有活细胞再生和/或新陈代谢。然而，缺乏再生活细胞的网膜可以含有不能通过减数分裂或有丝分裂的正常代谢过程增加代谢活细胞数量的代谢活细胞。此外，在缺乏代谢活细胞的网膜中，当使用显微镜观察时，代谢死细胞可能在组织学截面上是可见的，看上去类似于代谢活细胞；进一步的细胞残留物，包括核酸、小分子量蛋白质、脂质和多糖，而灭活组织还保留再生的灭活细胞和/或代谢的灭活细胞和/或大分子量的细胞质蛋白质，这种蛋白质包括(例如)用作趋化物的肌动蛋白。脱细胞的网膜或灭活网膜是指去除了全部、一部分或大量脂肪和核组分和细胞组分的网膜。