[发明专利]通过微小RNA装置进行细菌介导的基因调节

权利要求书

1.至少编码微小RNA(miRNA)或miRNA前体的DNA载体，其中所述miRNA能够调节真核、原核或病毒靶基因中至少一个的表达。

2.权利要求1的载体，其中所述miRNA前体是初级-miRNA。

3.权利要求1的载体，其中所述miRNA前体是miRNA前体。

4.权利要求1的载体，其中所述载体编码双链体miRNA，其中所述两条miRNA链包含基本互补的区域。

5.权利要求1的载体，其中所述miRNA是成熟的miRNA。

6.权利要求1的载体，其还包含原核启动子。

7.权利要求1的载体，其还包含真核启动子。

8.权利要求1的载体，其中所述至少一个靶基因是癌相关基因。

9.权利要求1的载体，其还编码Hly基因。

10.细菌，其包含微小RNA(miRNA)、miRNA前体或至少编码所述miRNA或所述前体的DNA分子，其中所述miRNA能够调节真核、原核或病毒靶基因中至少一个的表达。

11.权利要求10的细菌，其中所述前体是miRNA前体。

12.权利要求10的细菌，其中所述前体是初级-miRNA。

13.权利要求10的细菌，其中所述细菌是活的侵入性细菌。

14.权利要求10的细菌，其中所述细菌是活的侵入性细菌的衍生物。

15.权利要求10的细菌，其中所述细菌是非致病性且无毒性的。

16.权利要求10的细菌，其中所述细菌是选自利斯特氏菌、志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌和双歧杆菌的减毒菌株。

17.权利要求10的细菌，其中所述细菌选自耶尔森菌属物种、大肠杆菌属物种、克雷伯氏菌属物种、博德特氏菌属物种、奈瑟氏球菌属物种、气单胞菌属物种、弗朗西丝氏菌属物种、棒杆菌属物种、柠檬酸细菌属物种、衣原体属物种、嗜血菌属物种、布鲁氏菌属物种、分枝杆菌属物种、军团杆菌属物种、红球菌属物种、假单胞菌属物种、缠绕杆菌属物种、沙门氏菌属物种、弧菌属物种、芽孢杆菌属物种、利什曼虫属物种和丹毒丝菌属物种，所述细菌已经经过遗传改造，以模拟志贺氏菌属物种、利斯特氏菌属物种、立克次体属物种和肠侵染性大肠杆菌属物种的侵入性质。

18.权利要求10的细菌，其还包含能够将所述前体加工成接近成熟miRNA的酶或核酶。

19.权利要求18的细菌，其中所述酶是内切核酸酶。

20.权利要求10的细菌，其还包含细菌核糖核酸酶III、切酶、切酶样酶、Drosha和Pasha中的至少一种。

21.权利要求10的细菌，其还包含酶，所述酶从所述细菌中释放到靶真核细胞的细胞质后帮助转运遗传物质。

22.权利要求21的细菌，其中所述酶是Hly蛋白质。

23.权利要求10的细菌，其还包含控制所述DNA分子表达的原核启动子。

24.权利要求23的细菌，其中所述启动子是T7启动子。

25.权利要求10的细菌，其还包含控制所述DNA分子表达的真核启动子。

26.权利要求10的细菌，其中所述DNA分子还编码Hly基因。

27.权利要求10的细菌，其中所述真核基因是动物基因。

28.权利要求10的细菌，其中所述真核基因是哺乳动物或鸟类基因。

29.权利要求10的细菌，其中所述至少一个靶基因是癌相关基因。

30.向动物细胞递送微小RNA(miRNA)或miRNA前体的方法，所述方法包括用权利要求10-29中任一项的所述细菌感染所述动物细胞。

31.权利要求30的方法，其中所述动物细胞是人细胞。

32.权利要求30的方法，其还包括在感染后裂解所述细菌。