[发明专利]用于固定/稳定化样品的方法和装置

说明书

本发明涉及用于固定和/或稳定样品的方法和装置。稳定化生物分子和/或 固定组织，从而使其耐久。需要稳定化的生物分子具体包括DNA、RNA和蛋 白质。

文献WO 03/040697和DE 4019182A1揭示了固定组织样品，使固定样 品脱水并用石蜡包埋。将包埋在石蜡中的样品切成薄片，在显微镜下进行研 究。根据文献DE 4019182A1，超声有助于样品的浸渍。文献DE 19820466 A1揭示了用超声破坏生物样品。

为了能够稳定生物样品，尤其重要的是使稳定液或稳定流体能够足够快 地渗透含生物分子的样品。具体说，如果生物样品是组织，为使组织成功固 定，优选使用能够足够快地渗透所述组织的固定液或固体流体。

在现有技术中，稳定液生产商规定了稳定期间必须遵守的边界条件。因 此，稳定液生产商声称，为在样品的每个点均匀稳定，样品不能超过一定尺 寸，尤其是生物分子，例如RNA。这种声明可能规定了为实现所需的稳定化 作用，样品不能超过某一厚度。在一些情况下，还会添加其他几何学规定。 例如，实验室助手必须用解剖刀将样品调整到所需大小，然后将样品置于稳 定液中。此外，在许多情况下，生产商规定为实现所需稳定化作用，稳定液 和样品必须维持一定比率。

如果需要固定组织，生产商常常不会规定固定时必须遵守的任何边界条 件，尤其是在需要固定的组织用于组织学研究时。对于组织学研究，原则上 使用福尔马林作为固定液。将所需组织置于福尔马林中，因而固定。

虽然原则上对于使用含甲醛的固定液(例如福尔马林)进行固定没有要 求，但在稳定组织的情况下证明不宜采用超过尺寸的样品。因此，即使使用 含甲醛的固定液，为成功固定组织，建议不要超过某一大小或尺寸。

文献US 7,147,826B2揭示了提供可闭合的可渗透篮，将其置于另一含稳 定液的器皿中。液体从所有方向渗透进入可渗透篮。如果所述篮含有需要稳 定的生物样品，需要确保稳定液能够从所有方向达到样品。

文献US 2003/0087423A1也揭示了提供用于生物样品的可渗透篮。然 而，在这种情况下，将篮紧固于容器盖以便于掌控。同样，溶液能够从所有 方向可靠且完全地达到篮中包含的样品。

文献EP 1262758A1揭示了另一种用于制备组织的可渗透容器。

现有技术已知塑料制成的具有铰接盖的盒，商品名“Histosette”，用于控 制组织样品进行处理或组织脱水。Histosette的底部或盖区至少是3厘米×2.5 厘米。所述盒至少0.5厘米高或厚。底物或盖区为筛孔形式，或具有大量狭 缝，使得例如在组织脱水期间液体能够进入盒。

如果使用Histosette进行组织脱水，然后进行组织学研究，首先将组织置 于福尔马林中进行固定，然后将经过固定的组织切成所需大小以匹配 Histosette。再将组织置于Histosette中，关闭Histosette。然后将Histosette与 其包含的组织一起置于自动化装置中，自动进行脱水。

所述自动化装置中规定的脱水步骤包括用固定液重复处理已经固定的组 织。然而，在该发明涵义内并未固定组织，因为组织先前已经固定。然后， 将Histosette与其包含的组织一起成功浸入醇浓度越来越高的各种醇浴中。醇 从组织提取水。为确保组织温和脱水，从一个醇浴到下一个醇浴非常缓慢地 提高醇浓度。

然后将Histosette与其包含的组织一起浸入中间介质，例如二甲苯中。中 间介质置换组织中的醇。与醇不同，中间介质与石蜡混溶，便于后续的石蜡 处理。

然后，将Histosette与其包含的组织一起浸入热的液体石蜡中。然后，石 蜡渗透进入组织。如果石蜡以所需方式渗透进入组织，从自动装置中取出 Histosette。然后将已发生一定程度固化的包含组织片的石蜡转移到小容器或 “模”中，模顶端开口，用热的液体石蜡覆盖，从而在石蜡冷却之后，得到包 含组织的石蜡块。当石蜡冷却时，得到包埋在石蜡中的脱水样品。为进行组 织学研究，制备微米厚度的组织切片。将这些组织切片安装到载玻片上，脱 蜡，染色，显微镜下进行评价。用含甲醛的固定液进行固定的一个缺点在 于，有时生物分子发生不可逆交联而被破坏。因此，难以或不可能分离适合 分析研究的生物分子。