[发明专利]HbA1c测定方法

说明书

技术领域

本发明涉及HbA1c测定中使用的含血红蛋白试样的制备方法及HbA1c测定方法。 

背景技术

作为指示生物体状态的指标，常对各种蛋白质的糖化率进行测定。其中血细胞内血红蛋白(Hb)的糖化率，尤其是HbA1c能够反映生物体内血糖值的过往的历史，因此被视为糖尿病诊断及治疗等中重要的指标。HbA1c为葡萄糖结合于HbA(α₂β₂)的β链N末端氨基酸(缬氨酸)上的形态，其值用HbA1c量与总Hb量之比(比例，％)表示。 

HbA1c例如可通过高效液相色谱(HPLC)法、免疫法、酶法、电泳法等进行测定，近年来，就确立利用酶法的简便的测定方法进行了研究。所述利用酶法的HbA 1c测定方法例如为以下的方法。首先，使蛋白酶作用于Hb，切出含β链N末端缬氨酸的片段。随后再使果糖胺氧化酶(以下称“FAOD”)作用于上述片段的糖化部分(即β链N末端缬氨酸的糖化部分)，产生过氧化氢。该过氧化氢量对应于上述Hb的β链N末端缬氨酸的糖化量。再向该反应液中添加过氧化物酶(以下称“POD”)以及通过氧化而显色的显色底物，POD能催化过氧化氢与显色底物间的氧化还原反应。此后通过吸光度测定等来测定上述显色底物的显色程度。在该方法中，吸光度的大小与显色的显色底物的量相应，上述显色的显色底物的量与生成的过氧化氢的量相应，过氧化氢的量如前所述与糖化量相应。即通过测定显色程度， 借助这样的氧化还原反应，可间接地测定糖化量。随后，利用该糖化量以及总Hb量可计算出HbA1c(％)。 

这种HbA1c(％)的测定通常由检测机构来进行，特别是，在健康检查等中，从患者采集的含Hb试样(例如全血试样、从全血回收到的血细胞试样、从全血中回收到的Hb试样等)，采集后并非立即供于测定。通常，这些含Hb试样在例如常温、冷藏或冷冻状态下保存后供测定。 

发明内容

然而，本发明人等在对上述酶法进行研究时，发现以下现象。即，将上述这种含Hb试样保存后再进行HbA1c检测时，将得到比使用刚采集的含Hb试样的测定值低的值。因此对于保存后测定的含Hb试样，很难维持与使用刚采集的含Hb试样的情况同等的测定精度。特别是，如上所述，由于HbA1c反映着生物体内血糖值的过往的历史，在糖尿病的治疗和预防中，与每次的测定值相比，了解经时变化非常重要。因此，对于引起测定值变动的主要因素，希望统一条件。但若要将含Hb试样从采集到测定的条件(例如，时间、温度等)保持为恒定，从效率上来说难以实现。 

因此，本发明的目的在于提供一种HbA1c的测定方法，即使对保存后的含Hb试样，也可维持与刚采集后同等的测定精度。 

本发明的含Hb试样的制备方法，其特征在于，其为测定HbA1c的方法中使用的含Hb试样的制备方法，包含下述(A1)或(A2)的工序。 

(A1)在抑制二氧化碳产生的状态下，保存Hb含有物的工序， 

(A2)从保存后的Hb含有物中，减少与Hb结合着的二氧化碳的工序。 

本发明的HbA1c测定方法，其特征在于，其为测定HbA1c的方法，包含下述(A)～(D)的工序。 

(A)通过本发明的制备方法，准备保存后的含Hb试样的工序， 

(B)对保存后的上述含Hb试样进行蛋白酶处理，切断上述含Hb试样中的血红蛋白的工序， 

(C)使果糖胺氧化酶作用于通过上述(B)工序得到的血红蛋白片段的糖化部分的工序， 

(D)通过测定上述糖化部分与果糖胺氧化酶的氧化还原反应来确定HbA1c的量的工序。