[发明专利]噬菌体与EB病毒的gp350蛋白融合载体疫苗的构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种噬菌体和EB病毒的gp350蛋白融合载体疫苗的构建方法，尤其是能够使用间隔子GPGPG连接的EB病毒的gp350蛋白与其它外源蛋白或蛋白表位的融合蛋白正确展示于噬菌体表面的重组噬菌体疫苗的构建方法。

背景技术

噬菌体展示是将外源遗传密码信息整合到个体噬菌体的基因组中，将外源蛋白质或多肽的基因表达产物与噬菌体外壳蛋白融合在一起，并在噬菌体表面展示。利用噬菌体展示技术研制基因工程抗原具有多种优势：(1)噬菌体作为表达产物的载体展示的是生物体自身翻译机制产生的天然构象产物，能很好的诱发机体的抗原-抗体免疫反应；(2)噬菌体有强的免疫原性，是天然的免疫佐剂，在噬菌体表面表达的多肽易于接近抗体，容易被免疫系统识别；(3)噬菌体可以募集T辅助细胞，而且噬菌体颗粒的不对称性有利于引发T细胞依赖的免疫反应；(4)由于噬菌体颗粒是由感染的细菌细胞分泌，噬菌体颗粒可以方便的大规模生产抗原用抗原表位，还可以在同一噬菌体上展示多个具有保护性作用的抗原决定簇，构建多价抗原；(5)纯化简单、花费少；(6)噬菌体颗粒稳定，对理化因素的抵抗力强。由于应用噬菌体展示技术研究基因工程抗原具有以上的优点，弥补了传统抗原和其它基因工程抗原产量不高、纯化复杂等缺陷，对新型抗原的开发具有重要意义。

EB病毒，英文全称Epstein-Barr virus，又称为人类疱疹病毒4，英文全称Human herpesvirus4。gp350蛋白是EB病毒的(Epstein-Barr virus，EBV)包膜糖蛋白，可与C3d受体CD21结合并表现出广泛的生物活性。gp350蛋白对免疫系统有广泛的影响。表达gp350蛋白的细胞可活化补体，不表达gp350蛋白的细胞无活化能力，而纯化的gp350蛋白可以有效地激活补体旁路。gp350蛋白与B细胞CD21结合可以导致IL-6RNA和IL-6蛋白量的增高。gp350蛋白可使嗜中性白细胞胞内IL-8和巨噬细胞炎症蛋白-1α(MIP-1α)mRNA积聚，并伴有IL-8和MIP-1α分泌的增多。gp350蛋白多肽还能降低CD23(IgE低亲和性受体)与CD21的结合，抑制IL-4诱导的IgE和IgG4的产生。

CD21是B细胞表达的C3d受体，同时也是EB病毒的gp350蛋白的结合位点。EB病毒通过gp350蛋白与CD21的结合而感染人体，感染后可诱导B细胞产生Ig。gp350蛋白还同时具有ADCC的抗原决定簇和介导EBV吸附宿主细胞表面受体CR2的位点，是CR2的特殊配体，EB病毒结合到CD21，覆盖了Ig受体，诱导不同水平的B细胞增殖，以gp350蛋白作为CR2的配体，通过共交联mIg和CR2观察对B细胞的刺激阈，发现低浓度的anti-IgD-gp350能刺激B细胞高度增殖。这依赖于Ig结构和CR2，因为CR2抗体能有效地阻止这种增殖，这说明将gp350蛋白连接到那些具有弱免疫原性的分子能使细胞系扩展，并且激活那些同时结合了抗原和CR2配体gp350蛋白的抗原特殊的B细胞，因此，交联gp350蛋白携带分子是提高人类对弱免疫原性分子免疫应答的一个理想方法。而且这种方法勿需外源性辅助因子的参与就能使B细胞系扩展和激活。早先曾有人使用抗体交联到C3d与CR2共扼抗原的方法提高抗体应答，即抗原结合到补体C3；如果同时交联了mIg和CD21，在低浓度抗原时就能诱导B细胞激活，在缺少mIg情况下，以抗CD21抗体交联B细胞的CR2同样能诱导B细胞的增殖和分化，并伴有T细胞因子的出现。如果用gp350蛋白替代C3d有很多优点，它解决了由于注射包括补体在内的任何自身抗原可能产生的自身抗体带来的影响。产生针对gp350蛋白的抗体是有利的，可以提供对EB病毒媒介的疾病的保护作用。

基于上述理论基础，我们发明了一种构建噬菌体和EB病毒的gp350蛋白融合载体疫苗的新方法，该方法适用于多种多表位、多蛋白融合的新型疫苗的设计构建。

发明内容

本发明将具有免疫增强作用的EB病毒的gp350蛋白与其它外源蛋白的融合蛋白共同展示于噬菌体载体表面组成新型的重组噬菌体疫苗，EB病毒的gp350蛋白能够发挥类似于传统疫苗中佐剂的作用。

本发明通过下列技术方案实现：一种噬菌体和EB病毒的gp350蛋白融合载体疫苗的构建方法，其特征在于它将EB病毒的gp350蛋白用间隔子GPGPG与其它外源蛋白或蛋白表位或其组合的融合蛋白相连接，并共同展示在噬菌体表面组成重组噬菌体疫苗。

所述EB病毒的gp350蛋白编码序列如下：