[发明专利]鸡蛋蛋黄中高附加值蛋白质的分离提纯工艺

说明书

技术领域：

本发明属于高附加值医用及食用蛋白质生物分离提纯领域，尤其是一种操作简便、成本低廉、容易放大、产出率高，适应工业化生产的鸡蛋蛋黄中高附加值蛋白质的分离提纯工艺。

背景技术：

鸡蛋蛋黄价格低廉、来源丰富、易于获得，是非常理想的优质蛋白质的最佳来源，其中的蛋白质主要包括脂蛋白的脱辅基蛋白、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、卵黄蛋白、高磷蛋白和微量小分子蛋白等。每一大类蛋白质又包括几种至数百种，可在食品工业、医药工业及生物技术领域广泛应用。例如：低密度脂蛋白具有优秀的乳化性质，可作为冷冻保护剂应用在诸如精子细胞等物质的冷冻保存；卵黄蛋白中的鸡蛋免疫球蛋白家族，含有超过二百种抗体，有着哺乳动物免疫球蛋白没有的优点，可帮助免疫系统抵御各种细菌、病毒、寄生虫及毒素，已被广泛应用于诊断和治疗癌症、胃肠炎、乙肝、异种器官移植及口腔等多种疾病，并在诸如诊断免疫分析和其他科学研究领域应用广泛；高磷蛋白具有优秀的乳化性质及很强的消毒和抗氧化能力，并可显著促进人体对钙的吸收，有效地防止钙的流失；微量小分子蛋白以及脂蛋白的脱辅基蛋白和部分脂肪含有鸡蛋中的多种生长因子，在细胞培养等领域应用前景广阔，不仅成本低、成分明确且由于遗传学上的远距离，不易引起被培养哺乳动物细胞的免疫反应。各脂蛋白中的多种脂肪(如卵磷脂、不饱和脂肪酸等)也在保健食品领域应用广泛。

目前，现有针对蛋黄蛋白质的分离提纯工艺普遍存在以下问题：

(1)对部分高附加值蛋白质(如高磷蛋白、脂蛋白和生长因子)的分离提纯工艺研究不足，还没有开发出高效的提纯技术；

(2)虽然针部分蛋白质的分离提纯工艺(如免疫球蛋白)研究较多，但主要集中在实验室研究阶段，放大较难，即高效的工业化规模的提纯技术非常有限，成本较高；

(3)现存各蛋白质分离提纯多引入有机溶剂或大量高价金属离子，限制了这些蛋白质在食品或医药工业的进一步应用；

(4)针对单一蛋白质的分离提纯，各工艺之间缺少整合基础、兼容性差、无法充分综合利用各蛋白质的价值，难以灵活应对不同的市场需求。

因此尽管鸡蛋蛋黄优质蛋白质在诸多领域应用潜力巨大，但目前的实际应用仍然有限。

发明内容：

本发明是针对现有技术所存在的上述技术问题，提供一种操作简便、成本低廉、容易放大、产出率高，适应工业化生产的鸡蛋蛋黄中高附加值蛋白质的分离提纯工艺。

本发明的技术解决方案是：一种鸡蛋蛋黄中高附加值蛋白质的分离提纯工艺，其特征在于按如下步骤进行：

a.用去离子水稀释蛋黄原液并调节pH至4.0～7.0，凝结至上清液、蛋黄颗粒状沉淀分层；

b.将上清液、蛋黄颗粒状沉淀分离；

c.对分离得到的上清液用微滤或盐析处理，取富含高附加值蛋白质部分；

d.对富含高附加值蛋白质部分超滤膜浓缩处理或用超滤膜过滤与超滤膜浓缩组合处理，取浓缩物。

所述b步骤是离心分离，离心速度为3500～4500rpm，操作时间为20～40分钟。

用去离子水稀释离心所得到的上清液并调节pH至4.0～7.0。

在上述步骤的基础上，还包括如下步骤：

e.向分离得到的蛋黄颗粒状沉淀中加入去离子水及氯化钠，得溶解液；

f.用超滤膜渗析溶解液；

g.经低速离心处理所得渗析液，得到沉淀及上清液；

h.对上清液超滤膜浓缩处理，取浓缩物。

所述a、f步骤的凝结温度为1～6℃，凝结时间为4～20小时。

所述c步骤微滤处理的微滤膜孔径为0.11～0.22μm、盐析处理是加入浓度为30～40％饱和浓度的硫酸铵溶液。

所述d步骤超滤膜过滤的截留分子量分别设置为400kDa、100kDa、40kDa和20kDa；超滤膜浓缩处理的截留分子量不大于5000Da。

所述f步骤的用超滤膜渗析的超滤膜截留分子量为1000Da～5000Da。

所述a步骤是用浓度为0.34M/L的氯化钠稀释蛋黄原液；所述e步骤是用0.5M/L～0.7M/L氯化钠溶液溶解蛋黄颗粒状沉淀。

所述d、h步骤中超滤膜浓缩处理得到的滤液为a步骤稀释液。

本发明同现有技术相比，具有如下优点：

(1)生产效率高。利用不同截留分子量的超滤膜分离过程，可以有效的分离提纯蛋黄中的各蛋白组分，通过调节操作条件，可以最大限度的利用所有高附加值的蛋白质。