[发明专利]一种用色谱柱纯化氯法拉滨的方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是氯法拉滨的纯化方法，具体地说是一种用色谱柱纯化氯法拉滨的方法。 

背景技术

氯法拉滨(Clofarabine)是一种核苷嘌呤类抗癌药，对多种实体瘤均有作用，对急性白血病的治疗尤为有效，为FDA批准的首个专用于儿童白血病的药物。其结构式如下所示： 

美国专利申请WO03011877中公布了氯法拉滨的合成方法，即从1，3，5-三-O-苯甲酰基-α-D-呋喃核糖开始，经重排、氟代、溴化后得到1-溴-2-脱氧-2-氟-3，5-二-O-苯甲酰基-α-D-呋喃核糖，再与2-氯腺嘌呤缩合后脱保护合成而得。其中缩合及脱保护反应式如下所示。 

上述缩合反应的产物为β构型的产物III和III的α构型异构体的混合物，该混合物脱保护后的产物包括氯法拉滨和其α构型异构体。由于氯法拉滨和其α构型异构体两种物质的理化性质极其接近，常规的纯化方法如重结晶很难将α构型异构体从氯法拉滨中除去。 

上述专利公开了通过合成工艺条件控制能将α构型异构体的含量控制在5％左右。但中国专利申请CN101153049中描述，按照WO03011877公开的技术方案操作，α构型异构体的含量实际大于10％，并公开了通过控制反应条件使α构型异构体的含量减小至2％左右的技术方案。作为一种人用药物，氯法拉滨需要一种纯化方法来达到更高纯度。 

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种用色谱柱纯化氯法拉滨的方法，该方法使氯法拉滨的含量达到99.8％以上，收率达到90％以上。

本发明的技术方案包含以下步骤： 

(1)采用反相大孔吸附树脂为色谱柱填料制备色谱柱； 

(2)将浓度为0.001～0.025wt％的氯法拉滨粗品水溶液加入上述色谱柱； 

(3)先用纯水对步骤(2)中的色谱柱进行洗脱，然后依次用体积比逐渐减小的纯水/有机溶剂混合液作为洗脱液进行梯度洗脱，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮其中一种。 

本发明的技术方案中，所述步骤(1)中色谱柱填料为反相大孔吸附树脂，优选的填料型号为MCI-gel CHP20P和MCI-gel CHP20SS。MCI-gel CHP20P(粒径75-150μm)和MCI-gel CHP20SS(粒径63-150μm)为市售日本三菱公司生产的聚苯乙烯型反相大孔吸附树脂填料，广泛应用于植物提取物分离，脱色素等领域。本发明将他们应用于小分子化学药的纯化分离，特别是氯法拉滨的纯化。最优选的反相大孔树脂填料型号为MCI-gel CHP20P。 

将反相大孔吸附树脂填料在装柱前在乙醇中浸泡10小时以上，搅拌均匀装入色谱柱，并用纯水洗至流出液无乙醇，流速为6ml/min左右。选用的色谱柱为柱长：直径比为10～20：1的玻璃色谱柱。氯法拉滨水溶性较差，需要大量水溶解，从节约溶剂和时间考虑，优选浓度为0.025wt％的氯法拉滨粗品水溶液上样。上样时小心缓慢将氯法拉滨粗品水溶液沿色谱柱壁倒入，保持色谱柱上表面为水平。上完样后进行梯度洗脱，先用纯水洗脱，然后用纯水/有机溶剂体积比依次为20：1，20：2，20：3，20：4的洗脱液进行洗脱，有机溶剂优选乙醇。梯度洗脱时流速为2～6ml/min，优选6ml/min。随着洗脱液中甲醇、乙醇或丙酮所占比例的增多，洗脱液的极性降低，根据反相色谱的特点，极性较大的氯法拉滨的α构型异构体先流出色谱柱，极性较小的氯法拉滨在色 谱柱中停留的时间加长。 

以HPLC监测洗脱液中氯法拉滨含量，HPLC条件如下：色谱柱SupelDiscovery C18(250×4.6mm，5μm)，流动相为以氢氧化钠调pH到5.5的0.05M磷酸二氢钾溶液-乙腈(85：15，V/V)，进样量10μL，检测波长211nm，柱温：20℃，流速：1.0ml/min。收集以面积归一化法计算氯法拉滨含量大于99.8％，单一杂质含量小于0.1％的洗脱液，合并后在旋转蒸发仪上减压浓缩至干，得到氯法拉滨白色固体，浓缩过程中控制压力大小防止暴沸和冲料。 

本发明的方法以反相大孔吸附树脂作为色谱柱填料，并以适合的梯度洗脱条件，使氯法拉滨产品纯度达到99.8％以上，收率达到90％以上。操作简单，无毒无污染，无需特殊设备，溶剂可回收，适合工业化生产。 

下面结合具体实施方式的实施例对本发明作进一步详细说明。 

具体实施方式

制备实施例  氯法拉滨粗品的合成