[发明专利]一种脑中风相关位点检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及疾病相关位点检测技术领域，更具体地，涉及脑中风相关位点检测方法 技术领域，特别是指一种脑中风相关位点检测方法。

背景技术

脑中风(Stroke)主要是指供应脑的动脉发生粥样硬化，引起血管堵塞、狭窄或破 裂，造成部分脑组织的损害。它是由脑血管病变引起的脑部疾病的总称，故又称为“脑血 管病”、“脑血管意外”或“脑卒中”。主要分为出血性脑中风(脑出血或蛛网膜下腔出血)和 缺血性脑卒中(脑梗塞、脑血栓形成)二大类，以脑梗塞最为常见。脑中风具有发病急、 来势凶的特点，具有极高的病死率(急性期30％)和致残率(76％)，是世界上最重要的 致死性疾病之一，在我国每年脑中风的发病人数约有200万人以上。由于一直缺乏有效的 治疗措施，目前认为预防是最好的措施。

脑中风是多基因、多因素的疾病。到目前为止的人类基因组学研究结果显示，多个 基因中的变异位点，导致了人与人之间罹患脑中风遗传风险性的不同。已知的基因包括 strok-1，strok-2等。strok-1是同型半胱氨酸代谢中的关键酶之一，strok-1基因的变异会引 起高半胱氨酸血症，而高半胱氨酸血症在动脉粥样硬化和脑血管病的发病机制中起重要 作用。strok-2基因的表达产物具有舒张血管、抑制血小板的黏附和聚集和抑制血管平滑 肌细胞增殖等功能。这些基因中的特定变异位点均构成脑血管病的危险遗传因素。通过 检测个体该类变异位点的基因型，即可预测脑中风发病风险。

中风是完全能够预防的。只要饮食合理，注意控制血压，多参加有利于身体健康的 活动，加强对相关疾病的防治，可以将中风的发生率降低到最低限度，这就是一级预防。 尽管我们目前还不能全面说出死亡率下降的所有原因，但毫无疑问中风病人死亡率下降 与近年来重视中风的预防有关。因此，为了更早地预防脑中风的发生，需要在脑中风发 生前就提前通过基因检测准确筛查出高风险人群，并对这一人群进行有针对性的健康管 理，才能做到真正的早预防，再结合其它手段定期检测，真正实现脑中风的早发现、早 治疗，以达到提前进行个性化预防的目的。

发明内容

本发明的主要目的就是针对以上存在的问题与不足，提供一种脑中风相关位点检测 方法，该检测方法设计巧妙、操作简单、检测结果准确可靠，为是否进一步采取有针对 性的健康管理以及后续的检测手段提供参考依据。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

该脑中风相关位点检测方法，其特点是，包括步骤：

a.提取来自人的样本的基因组DNA；

b.根据至少2个脑中风相关基因分别设计一对Taqman探针对和一对引物对，所述 Taqman探针对的5’端和3’端分别标记荧光报告基团和荧光淬灭基团，分别对所述 基因组DNA进行荧光定量PCR扩增；

c.根据荧光定量PCR扩增结果来判断所述脑中风相关基因是否发生突变。

较佳的，所述脑中风相关基因的数目是4个。

更佳的，所述脑中风相关基因是MTHFR基因、ENOS基因、PDE4D基因和PON1基因。

更进一步地，所述Taqman探针对和所述引物对用于检测MTHFR基因的rs1801133位 点，ENOS基因的rs1799983位点，PDE4D基因的rs702553位点，PON1基因的rs622位点。

较佳的，所述Taqman探针对是SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列，所述 Taqman探针对的5’端分别标记FAM标记和HEX标记，3’端均标记TAMRA标记，所述引 物对是SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。

较佳的，所述Taqman探针对是SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列，所述 Taqman探针对的5’端分别标记FAM标记和VIC标记，3’端均标记TAMRA标记，所述引物 对是SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列。

较佳的，所述Taqman探针对是SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列，所 述Taqman探针对的5’端分别标记FAM标记和TET标记，3’端均标记TAMRA标记，所述引 物对是SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列。