[发明专利]一种定量指导孕前及孕期叶酸补充剂量的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种定量指导孕前及孕期叶酸补充剂量的试剂盒，通过同时检测与叶酸代谢能力密切相关的5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶基因(MTRR)上的单核苷酸多态性位点基因型来确定适合不同人群的叶酸补充剂量。

背景技术

叶酸是机体所需的重要营养素，为水溶性B族维生素，在绿叶蔬菜、水果及动物肝脏中含量丰富。叶酸在人体内以四氢叶酸的形式起作用，四氢叶酸是一碳单位的运载体，可运载甲基、甲烯基、甲醛基等一碳单位，参与体内氨基酸、嘌呤、嘧啶的合成。因而叶酸对细胞分裂增殖、组织修复和机体发育等都是不可缺少的营养素。

对于孕妇，补充叶酸尤其重要。叶酸缺乏会导致两种结果：第一，使同型半胱氨酸向甲硫氨酸转化出现障碍，进而导致高同型半胱氨酸血症，后者可引起血管内皮损伤、促进血管平滑肌细胞增生，引起凝血和纤溶系统功能失调，使血液处于高凝状态，也是引起妊娠高血压综合征的重要因素；第二，引起S-腺苷甲硫氨酸/S-腺苷同型半胱氨酸比值降低，抑制DNA甲基转移酶活性和DNA甲基化，造成染色体不分离现象，引起多种胎儿畸形。近年来发现，血浆中同型半胱氨酸水平升高与习惯性流产、妊娠高血压综合征(妊高征)、胎盘早剥、胎儿生长受限、胎儿畸形、死胎、早产、低体重儿等现象的发生密切相关。

妊娠头4周是胎儿神经管分化和形成的重要时期，此期叶酸缺乏可增加胎儿神经管畸形及早产的风险，而很多受孕者在早孕期并没意识到自己已经怀孕；更有研究显示，妇女在服用叶酸4周后，体内叶酸缺乏的状态才能得到明显的改善。因此，育龄妇女至少应在孕前3个月开始，适当多吃富含叶酸的食物和补充叶酸，以确保胚胎早期有一个较好的叶酸营养状态，预防胎儿神经管及其他器官畸形的发生。

育龄妇女服用叶酸增补剂时由于个人的遗传体质不同，存在叶酸代谢能力的差异，不同人群所需叶酸剂量不能一概而论。如服用剂量不足实际需求，达不到补充叶酸的效果；而盲目过量服用高浓度叶酸，会干扰孕妇的营养元素代谢，同样会影响胎儿发育，超量服用叶酸也会引起药品不良反应，反而会对孕妇和胎儿造成严重不良后果。所以不同身体状况与素质的育龄妇女必须根据自身情况，有的放矢地准备与补充所需要的叶酸。

因此，选取与育龄妇女孕前/孕期以及胎儿发育所需的叶酸代谢密切相关且研究明确的一些重要基因位点，综合利用现代科学研究成果，开发一项基于分子遗传基础的叶酸增补剂服用定量指导产品，将能够针对不同遗传体质人群提出适合其自身需求的叶酸补充剂量指导，具有很强的社会意义和广阔的市场前景。

目前，经证实并且机理研究清楚的与叶酸代谢密切相关的基因有：5，10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶基因(MTRR)。

MTHFR为5，10-methylenetetrahydrofolate reductase(NADPH)(亚甲基四氢叶酸还原酶)蛋白编码基因，主要作用是在叶酸代谢通路中将5，10-亚甲基四氢叶酸转化为具有生物学功能的5-甲基四氢叶酸盐。5-甲基四氢叶酸盐可以进一步进入甲基传递通路，通过同型半胱氨酸的重新甲基化过程间接的为DNA甲基化和蛋白质甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸量保持在一个较低的水平。研究发现，MTHFR基因存在多种多态型，影响MTHFR活性和热稳定性。常见的变异包括：(1)677C-T：MTHFR基因第677位密码子胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)替代，编码后酶分子中丙氨酸被缬氨酸替代，引起MTHFR热稳定性和活性降低，相对于正常的C/C基因型，纯合子T/T基因型MTHFR活性在37摄氏度降低50％～60％，在46摄氏度降低65％；(2)1298A-C：编码后酶分子中谷氨酸被丙氨酸替代，引起MTHFR活性降低。1298A-C与677C-T不同的是，纯合子和杂合子血浆同型半胱氨酸升高和叶酸降低均不明显。然而，如果同时存在1298A-C和677C-T复合变异的杂合子，则MTHFR活性低于野生型40％。