[发明专利]一种用于检测鼠疫细菌感染的免疫层析试纸及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及生物化学领域，尤其涉及一种免疫层析试纸，具体来说是一种用于检测鼠疫细菌感染的免疫层析试纸及其制备方法。

背景技术：

鼠疫耶尔森氏菌病的实验室诊断主要为病原学诊断和血清抗体检测，病原学诊断方法是采集疑似鼠疫耶尔森氏菌病患者或病畜皮肤或腺体溃疡病灶分泌物、脓、血、痰样品，接种胰酶大豆血琼脂培养基，37℃5％CO2培养72小时，挑取灰白色、圆形的菌落，制备玻片并作革兰氏染色，如为革兰氏阴性球杆菌，则继续进行生化鉴定和血清学试验，必要时需进行动物独立测定。血清抗体检测的原理为：人、家畜和野生动物感染鼠疫耶尔森氏菌后均可出现有诊断意义的血清抗体，初次特异抗体的出现一般是在感染后1周，4-6周抗体滴度可达最高，以后逐步下降，半年至一年后仍能检测出特异性抗体。

鼠疫感染一周左右会出现特异性抗体，此时可用血清学检查进行疾病诊断。鼠疫血清学诊断方法有：细菌凝集反应、沉降反应、碳凝集反应、补体结合反应、免疫荧光反应、放射免疫沉淀反应、免疫电泳、酶联免疫吸附试验和红细胞凝集试验(简称血凝)，目前应用最广的是血凝。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题在于提供一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌感染的免疫层析试纸及其制备方法，所述的这种用于检测鼠疫耶尔森氏菌感染的免疫层析试纸及其制备方法要解决现有技术中的用于检测鼠疫感染的方法测试时间长，测试方法复杂的技术问题。

本发明提供了一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌感染的免疫层析试纸，包括一层硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上设置有一条检测线和质控线，所述的检测线为鼠疫耶尔森氏菌多糖抗原，所述的质控线为能与金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体，所述的硝酸纤维素膜设置在一层吸水垫上，所述的硝酸纤维素膜上设置有一层金标垫，所述的金标垫为玻璃纤维膜或聚酯膜，所述的玻璃纤维膜或聚酯膜中设置有金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针溶液，所述的金标垫上设置有一层样品垫。

本发明还提供了一种用于检测鼠疫耶尔森氏菌感染的免疫层析试纸的制备方法，包括一个鼠疫耶尔森氏菌多糖抗原的制备方法，一个将鼠疫耶尔森氏菌多糖抗原以及可与金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体固化在硝酸纤维素膜上形成检测线和质控线的步骤，一个将硝酸纤维素膜粘贴在吸水纸垫上的步骤，一个制备金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)标记胶体金探针的步骤，一个制备金标垫的步骤，一个在金标垫上粘贴样品垫的步骤，得到用于检测鼠疫耶尔森氏菌感染的免疫层析试纸。

本发明和已有技术相对比，其效果是积极和明显的。本发明的检测鼠疫耶尔森氏菌感染的免疫层析试纸及其制备方法与现有的其他方法相比，特异性强、更简便、更快速，更适于临床和特殊情况下现场使用。

具体实施方式：

实施例1检测鼠疫感染的免疫试纸的制备

1.材料

氯金酸(HAuCl₄.4H₂O)，分析纯，上海试剂一厂

柠檬酸三钠(Na₃C₅H₅O₇.2H₂O)，分析纯，北京化工厂

碳酸钾(K₂CO₃)分析纯，北京化工厂

金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)，购于Amersham Pharmacia Biotech公司鼠疫耶尔森氏菌株(从俄罗斯引进，株名为E.V，现由中国人名解放军微生物流行病研究所菌种库保存，保藏号410049)

鼠疫阳性血清国家标准品，国家生物制品鉴定所生产豚鼠、黄鼠、兔和人鼠疫阳性和阴性血清，中国疾病预防控制中心鼠疫布氏杆菌预防控制基地提供。

硝酸纤维膜，美国Millipore公司。

玻璃纤维膜，上海良信公司。

塑料背板，北京燕华公司。

间接血凝鼠疫测定药盒，中国疾病预防控制中心鼠疫布氏杆菌病预防控制基地生产(Lot No.200301)。

2.1鼠疫耶尔森氏菌可溶性蛋白多糖复合物抗原的制备

将鼠疫杆菌接种4％甘油普通培养基，37℃培养48小时，用无菌生理盐水洗下菌苔，菌悬液约为比浊浓度(1X10⁸个菌/ml)，流通蒸汽1h，冷却至室温后8000r/min离心15min，收集上清备用。

2.2金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)胶体金探针的制备：