[发明专利]人B淋巴细胞刺激因子受体的氨基酸模拟表位及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物制药和基因工程领域，特别是涉及B淋巴细胞刺激因子受体(BAFF-R)蛋白的一个模拟表位肽及其编码DNA与其在制备抗肿瘤疫苗和药物中的应用。

背景技术

1.BAFF-R分子及其抑制剂的相关研究

人BAFF-R是一个全长为184氨基酸残基的III型膜蛋白，人鼠同源性为56％。其胞外部分的CRD区只有4个半胱氨酸，是已知的TNFR超家族成员中最少的。BAFF-R基因定位于人22q13.1-13.31，在脾脏、淋巴结和外周血中表达，而在骨髓和胎肝中未检测到其存在。与B淋巴细胞刺激因子其它两个受体TACI和BCMA不同，BAFF-R只与BAFF高亲合力结合，它在B细胞发育及其功能方面发挥着重要的作用；与BAFF-R有关的信号途径似乎与BAFF引起的B细胞增殖效应直接相关，一旦其缺失将导致B细胞内稳态失调，BAFF-R的可溶性蛋白可明显地抑制BAFF对B细胞的刺激作用，Thompson和Yan同时发现在一种免疫缺陷型小鼠模型A/WySnJ中BAFF-R基因的第三外显子发生突变而缺失，表现为免疫能力的极度低下，这与BAFF基因敲除小鼠的表型几乎是一致的，而BCMA与TACI基因敲除的小鼠表现的症状要轻得多，前者与野生型相比无任何差异，后者只呈现出轻度的B淋巴细胞数量增多和免疫器官的肿大。因此推测，BAFF-R是BAFF介导成熟B细胞存活的最重要的受体。

基于BAFF-R作为靶点的药物开发是目前慢性B淋巴细胞白血病治疗领域的热点。早在2000年，美国人类基因组公司(HGSI)就开发了放射性同位素标记的BAFF蛋白LymphoRadTM-131用于治疗B-CLL，目前正处于临床试验阶段；最近Ramadevi Nimmanapalli等人在权威杂志《BLOOD》上报道BAFF/rGel也是一种潜在靶向BAFF-R的B-CLL的治疗性融合蛋白。近年来，特别是随着分子生物学、生物化学、免疫学等的飞速发展，新理论、新技术的不断出现和成熟，为探索新的肿瘤疫苗治疗奠定了坚实的基础，因此，设计筛选BAFF-R有效抗原表位，设计新型肿瘤抗原肽，是慢性B淋巴细胞白血病的新的治疗办法。

2.治疗性疫苗研究进展

治疗性疫苗从诞生到现在已有200多年的历史，目前虽不能完全代替药物，但已成为疾病治疗的辅助手段。据2002年统计，有55种肿瘤治疗性疫苗进入临床研究阶段，其中6种已进入临床III期。利用致病因子增强机体的特异免疫应答，尤其是细胞免疫应答，是治疗性疫苗的发展方向，其目标是使特异性抗原具有免疫原性及免疫反应性，产生保护性细胞免疫应答。外来抗原如何顺利被抗原提呈细胞摄取，以及如何突破机体对它的低反应性，成为治疗性疫苗亟待解决的问题。预防性疫苗针对感染原的免疫反应，通过产生体液免疫反应来识别并中和再次入侵的病原体，从而阻止疾病发生。而治疗性疫苗目的在于诱导抗原特异的T细胞反应，能杀伤肿瘤细胞或感染有病原体的病态细胞。它在抗原诱导产生疾病之后接种，接种对象是慢性疾病患者，其免疫应答常处于低下水平，如何突破免疫耐受以及增强机体的免疫应答是研究中经常出现的问题。目前，治疗性疫苗的研究已经取得重大突破，细胞型疫苗、多肽型疫苗、重组基因疫苗等的研究都在广泛开展。

3.噬菌体展示技术研究进展

噬菌体抗体库技术，能够绕过免疫动物和细胞融合等过程制备单克隆抗体，并能通过在原核细胞体系中抗体片段的克隆选择，分离得到几乎所有抗原的人源性抗体，因此，已成为生命科学研究的突破性进展之一。噬菌体展示技术的最大优点是一旦噬菌体库建成后，就可以根据需要从库中获得能与目标抗原结合的抗体，完成初期的筛选通常只需要2-3周，而且抗体可以进行大批量生产。一些生物技术公司已经利用噬菌体展示技术生产人抗体治疗剂，其中包括Cambridge抗体技术(CAT)、Crucell、Dyax和Morphosys。第一个治疗风湿性关节炎的人抗体药物HUMIRA已经上市，该抗体是CAT公司和Abbott实验室研制的。利用噬菌体展示技术生产的HUMIRA证明了人单克隆抗体的有效性，271名病人的治疗数据显示，HUMIRA改善了50％病人的类风湿性关节炎症状；另一报道中只提到一些轻微的副作用，如注射位点反应，皮疹和头痛，这表明HUMIRA的安全性和较好的耐受性。