[发明专利]一种蝮蛇生物活性酶的制备方法

权利要求书

1.一种蝮蛇生物活性酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)取蝮蛇毒干粉，用该蛇毒干粉1～5倍重量份的pH7.1～8.0的0.005～0.01mol/L缓冲液溶解，经8000～10000转高速离心30～60分钟，取上清液用阴离子交换层析柱分离，先用含0.01～0.05mol/L氯化钠的pH7.1～8.0的0.005～0.01mol/L缓冲液洗脱，再用含0.1mol/L氯化钠的pH7.1～8.0的0.005～0.01mol/L缓冲液洗脱，收集洗脱液，在280nm的波长下对洗脱液进行紫外分光光度计检测，得到波长280nm吸收图谱，收集各吸收峰的洗脱液中能水解苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐的部分，将收集液透析除盐，冻干成粉；

(2)将步骤(1)中获得的冻干粉，用0.01～0.05mol/L碳酸氢钠洗脱液溶解，经8000～10000转高速离心30～60分钟，取上清液用凝胶柱分离，然后用0.01～0.05mol/L碳酸氢钠洗脱液洗脱，收集洗脱液，在280nm的波长下对洗脱液进行紫外分光光度计检测，得到波长280nm吸收图谱，收集各吸收峰的洗脱液中能水解苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐的部分，将收集液透析除盐，冻干成粉；

(3)将步骤(2)中获得的冻干粉，用pH5.0～6.0的0.01～0.03mol/L醋酸钠缓冲液溶解，经8000～10000转高速离心30～60分钟，取上清液用羧甲基-琼脂糖凝胶C1-6B阳离子交换柱分离，用氯化钠直线梯度方式洗脱，该氯化钠溶液的浓度从0mol/L线性递增至1mol/L，收集洗脱液，在280nm的波长下对洗脱液进行紫外分光光度计检测，得到波长280nm吸收图谱，收集吸收峰中第1I、III、IV号活性吸收峰的洗脱液，透析除盐，冻干成粉；

其中，步骤(1)中所述的缓冲液为Tris-HCl缓冲液或磷酸盐缓冲液；所述的阴离子交换层析柱为二乙氨乙基交联葡聚糖A-50型或二乙氨乙基交联葡聚糖A-25型；

步骤(2)中所述的凝胶柱为葡聚糖凝胶G-75型或葡聚糖凝胶G-100型；

所述制备方法中透析除盐的条件为透析袋孔径为8000～10000道尔顿，将收集液装入透析袋，放入收集液20～50倍体积的蒸馏水，搅拌透析，4～8小时换一次蒸馏水，透析18～32小时。