[发明专利]一种结核分枝杆菌快速检测系统及方法

说明书

技术领域

本发明属于医学分子生物学检测技术领域，具体是指一种利用细菌学培养技术以及胶体金检测方法来对结核病人临床样本进行快速检测的系统和方法。

背景技术

结核病是由结核杆菌引起的慢性传染病，主要发生于肺部，给人类健康和社会发展带来严重后果。世界卫生组织(WHO)指出：全球每年有900万新结核病例，每年约有350万死于结核，占各种传染病死亡人数68.3％，是各种传染病死亡总和的一半以上。在结核病发病分布上，非洲、亚洲是高发地区，患病率常在500-700/10万，发病率100-200/10万，死亡率20—70/10万。我国结核病疫情居高不下，其中严重的传染性肺结核病人约135万，每年约13万人死于结核病。西方发达国家结核病疫情以10—15％递减，每5-7年可使疫情减少50％。但是，近几年由于全球人口增长、流动和难民增加，人类免疫缺陷病毒(HIV)感染流行，造成结核病卷土重来。鉴于此，世界卫生组织(WHO)在1993年宣布：“全球结核病紧急状态”，致使结核病再次成为全球最紧迫的公共卫生问题。结核病也成为我国重点防治的疾病之一。

传统的结核分枝杆菌检测方法主要是利用罗氏固体培养基斜面培养，4～8周后，观察斜面是否存在结核菌菌落。但是，这种方法的主要问题就是结核菌在固体培养基上生长比较慢，不能及时得到检测结果。为了缩短结核病样本检验时间，突破结核菌生长慢、检测时间滞后的技术瓶颈，研发人员开发了一系列以液体培养基为基础的结核菌培养检测系统。

液体培养基的主要优势就是样本在液体培养基中繁殖速度，极大的缩短培养时间。但是，由于样本在液体状态下培养，很难观察培养结果，这个问题也是科研人员需要突破的技术瓶颈。针对这个问题目前已出现了能较好解决上述问题的BACTEC 460TB自动检测系统、BACTEC MGIT 960检测系统和3D检测系统，但上述介绍的结核菌检测系统，都存在几个问题：首先，检测系统的准确性太低，各个系统几乎都是利用细菌学检测方法检测培养基颜色变化来表征样本中是否存在阳性样本，最终得出检测结果；其次，检测系统还需要配备一系列的检测设备，检测成本比较高。

发明内容

本发明的目的是提供一种结核分枝杆菌快速检测方法，本发明克服了上述背景技术中存在的问题，无需大型仪器设备，仅仅需要一台普通细菌培养箱就可以满足检测条件，在中小型结核菌控制检验实验室就可以使用，大大降低了成本且检测特异性好、灵敏性高。

本发明的另一个目的是提供了一种快速且培养阳性率高的结核菌液体培养基和结核分枝杆菌快速检测的胶体金免疫层析检测试剂条。

本发明的技术方案如下：一种结核分枝杆菌快速检测系统，包括结核菌液体培养基和结核分枝杆菌检测试剂条，结核分枝杆菌检测试剂条利用胶体金免疫层析技术对结核分枝杆菌特异性抗原MPB64进行特异性检测，该试剂条依次由样品垫、标记垫、延展垫、吸收垫组成：样品垫用于承接吸收样本；标记垫上含有胶体金标记的MPB64蛋白单克隆抗体，其制备过程如下：取胶体金标记MPB64蛋白单克隆抗体溶液，均匀含浸在标记垫上，然后将标记垫放入冷冻干燥机上冻干过夜，至完全干燥制得；

延展垫上设有两个条带，一条是检测线T线，T线上固定MPB64蛋白另一单克隆抗体，其制备过程如下：将MPB64蛋白另一单克隆抗体用0.01M PBS稀释成浓度为2.5±0.1mg/ml的抗体溶液，用点膜仪以1μl/cm的量喷于延展垫上形成T线；一条是控制线C线，C线上固定有免疫球蛋白多克隆抗体，其制备过程如下：将免疫球蛋白多克隆抗体用0.01M PBS稀释成浓度为2±0.1mg/ml的抗体溶液，和T线间隔为0.8cm的位置，用点膜仪以1μl/cm的量将抗体溶液喷于延展垫上，形成C线，最后将设有T线和C线的延展垫置37℃烤箱中干燥30min，充分干燥制得；

吸收垫用于拉动液体样本通过整个试剂条完成检测反应；上述样品垫、标记垫、延展垫、吸收垫依次设在底板上。

本发明的结核分枝杆菌快速检测系统的结核菌液体培养基以Middle brook7H9肉汤培养基为基础成分，经高压灭菌冷却后，添加小牛血清白蛋白、生物素、过氧化氢酶以及维生素B6，上述各个成分在液体培养基中的终浓度是：小牛血清白蛋白1-20g/L；生物素0.01-1mg/L；过氧化氢酶1-10mg/L；维生素B60.01-1mg/L。