[发明专利]一种结核分枝杆菌快速检测系统及方法

权利要求书

1、一种结核分枝杆菌快速检测系统，包括结核菌液体培养基和结核分枝杆菌检测试剂条，其特征在于：结核分枝杆菌检测试剂条利用胶体金免疫层析技术对结核分枝杆菌特异性抗原MPB64进行特异性检测，该试剂条依次由样品垫、标记垫、延展垫、吸收垫组成：

样品垫用于承接吸收样本；

标记垫上含有胶体金标记的MPB64蛋白单克隆抗体，其制备过程如下：取胶体金标记MPB64蛋白单克隆抗体溶液，均匀含浸在标记垫上，然后将标记垫放入冷冻干燥机上冻干过夜，至完全干燥制得；

延展垫上设有两个条带，一条是检测线T线，T线上固定MPB64蛋白另一单克隆抗体，其制备过程如下：将MPB64蛋白另一单克隆抗体用0.01M PBS稀释成浓度为2.5±0.1mg/ml的抗体溶液，用点膜仪以1μl/cm的量喷于延展垫上形成T线；一条是控制线C线，C线上固定有免疫球蛋白多克隆抗体，其制备过程如下：将免疫球蛋白多克隆抗体用0.01M PBS稀释成浓度为2±0.1mg/ml的抗体溶液，和T线间隔为0.8cm的位置，用点膜仪以1μl/cm的量将抗体溶液喷于延展垫上，形成C线，最后将设有T线和C线的延展垫置37℃烤箱中干燥30min，充分干燥制得；

吸收垫用于拉动液体样本通过整个试剂条完成检测反应；

上述样品垫、标记垫、延展垫、吸收垫依次设在底板上。

2、如权利要求1所述的结核分枝杆菌快速检测系统，其特征在于：所述的结核菌液体培养基以Middle brook　7H9肉汤培养基为基础成分，经高压灭菌冷却后，添加小牛血清白蛋白、生物素、过氧化氢酶以及维生素B6，上述各个成分在液体培养基中的终浓度是：小牛血清白蛋白1-20g/L；生物素0.01-1mg/L；过氧化氢酶1-10mg/L；维生素B6 0.01-1mg/L。

3、如权利要求2所述的结核分枝杆菌快速检测系统，其特征在于：所述的结核菌液体培养基中小牛血清白蛋白、生物素、过氧化氢酶以及维生素B6在液体培养基中的终浓度是：小牛血清白蛋白浓度2-10g/L；生物素浓度0.1-0.5mg/L；过氧化氢酶浓度2-5mg/L；维生素B6浓度0.05-0.3mg/L。

4、如权利要求2或3所述的结核分枝杆菌快速检测系统，其特征在于：结核菌液体培养基中还添加有多粘菌素B、萘啶酸、阿莫西林的一种或多种，培养基中的浓度是：多粘菌素B浓度0.1-100U/mL；萘啶酸0.1-50浓度mg/mL；阿莫西林浓度0.1-20mg/mL。

5、如权利要求4所述的结核分枝杆菌快速检测系统，其特征在于：添加的多粘菌素B、萘啶酸、阿莫西林在培养基中的浓度是：多粘菌素B浓度20-60U/mL；萘啶酸浓度10-30mg/mL；阿莫西林浓度1-10mg/mL。

6、如权利要求1所述的结核分枝杆菌快速检测系统，其特征在于：延展垫采用硝酸纤维膜材料制成。

7、利用权利要求1或2所述的结核分枝杆菌快速检测系统的检测方法如下：第一步：样本处理；第二步：结核菌液体培养基中培养：接种后的液体培养基，放入到5％-10％CO2的培养箱中，35℃-38℃培养；第三步：试剂条检测：样本在液体培养基中培养7-14天，吸取适量培养液，添加到试剂条的样品垫上，试剂条室温水平放置，10min-15min读出检测结果。

8、如权利要求7所述的结核分枝杆菌快速检测系统的检测方法如下，其特征在于：一个样本利用2～3个试剂条同时检测。