[发明专利]基因捕获载体及建立全基因组突变胚胎干细胞库的方法

权利要求书

1、一组用于全基因组基因捕获的捕获载体组，其特征在于四个载体从5’到3’的结构顺序分别为：

Trp1：LTR-SA-βgeo-pA-LTR；

Trp2：LTR-SA-LacZ-pA-PGKp-Neo-SD-LTR；

Trp3：LTR-SA-LacZ-pA-PGKp-Neo-LoxP-IRES-LoxP-SD-LTR；

Trp4：LTR-frt-F3-LoxP-Lox511-SA-βgeo-pA-LoxP-Lox511-frt-F3-LTR；

其中LTR是长末端重复序列；SA是剪接受体；SD是剪接供体；Neo是新霉素抗性基因；βgeo是β-半乳糖苷酶和新霉素抗性基因融合产物；pA是poly(A)序列；LacZ是β-半乳糖苷酶；PGKp指磷酸甘油酸激酶(PGK)启动子；IRES为内核糖体进入序列；frt-F3是FLP重组酶(flip recombinase)识别位点；LoxP-Lox511为Cre/lox重组系统识别位点。

2、如权利要求1所述的载体组，其特征在于四个载体联合使用。

3、如权利要求1所述的载体组，其特征在于可以对全基因组基因进行捕获。

4、如权利要求1所述的载体组，其特征在于尤其可以对胚胎致死基因进行捕获。

5、一种建立全基因组突变胚胎干细胞库的方法，其特征在于包括步骤：

A：将捕获载体组

Trp1：LTR-SA-βgeo-pA-LTR；

Trp2：LTR-SA-LacZ-pA-PGKp-neo-SD-LTR；

Trp3：LTR-SA-LacZ-pA-PGKp-Neo-LoxP-IRES-LoxP-SD-LTR；

Trp4：LTR-frt-F3-LoxP-Lox511-SA-βgeo-pA-LoxP-Lox511-frt-F3-LTR；

构建成质粒载体或逆转录病毒载体；

B：构建的质粒载体或逆转录病毒载体转化至胚胎干细胞；

C：筛选阳性胚胎干细胞，确定捕获基因序列，定位基因在基因组中的位置，建立全基因组基因突变胚胎干细胞库。

6、如权利要求5所述的方法，其特征在于质粒载体是pBR、pUC、pSP或pGEM中的一个。

7、如权利要求5所述方法，其特征在于胚胎干细胞是小鼠、大鼠、兔、豚鼠、猪、羊或山羊的胚胎干细胞。

8、如权利要求5所述的胚胎干细胞库，其特征在于该细胞库包含全基因组所有基因。

9、如权利要求8所述的全基因组所有基因，其特征在于包含胚胎致死基因。