[发明专利]表皮生长因子培养液、利用培养液治疗糖尿病创伤的外用药及其制备方法

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种药物，特别涉及一种表皮生长因子培养液、利用培养液治疗糖尿病创伤的外用药及其制备方法。

(二)背景技术

糖尿病以危及人类健康“三大杀手”之一高居诸病前锋。在全世界构成庞大的患者群。据近年统计，中国的年发病率在3.2％以上，且呈不断上升趋势，发病形势日趋严峻。糖尿病创伤导致的坏疽及截肢是糖尿病并发症的严重后果之一，糖尿病创伤的治疗至今仍为困扰医界的棘手难题。患者中偶遇创伤，往往因延误治疗而后果惨重。全世界都在寻求治疗糖尿病创伤的高效制剂，广大患者更渴盼日常创伤能及时自我处理的普及制剂。

(三)发明内容

本发明为了弥补现有技术的不足，提供了一种效果显著、使用便捷的表皮生长因子培养液、利用培养液治疗糖尿病创伤的外用药及其制备方法。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种表皮生长因子培养液，其特殊之处在于：是采用如下方式制成的：在无菌控制操作条件下摘取哺乳动物幼仔下颌腺活体组织，快速称重后剪为碎块，经1640培养液自然沉淀洗涤3次后，置于含有20％FCS的1640营养液的培养瓶中，在37℃，5％CO₂孵箱中培养6-7天；细胞培育过程中，培养液保持清彻，分次收集全部上清液，并于-20℃冷冻保存即可。

一种利用培养液治疗糖尿病创伤的外用药，其特殊之处在于：由以下体积份数的原料制成：

表皮生长因子培养液1-2份；3％壳聚糖混悬液1-2份。

本发明的利用培养液治疗糖尿病创伤的外用药，所述外用药为涂剂或敷贴剂。

一种利用培养液治疗糖尿病创伤的外用药的制备方法，其特殊之处在于：包括如下步骤：

(1)制备表皮生长因子培养液：在无菌控制操作条件下摘取哺乳动物幼仔下颌腺活体组织，快速称重后剪为碎块，经1640培养液自然沉淀洗涤3次后，置于含有20％FCS的1640营养液的培养瓶中，在37℃，5％CO₂孵箱中培养6-7天；细胞培育过程中，培养液保持清彻，分次收集全部上清液，并于-20℃冷冻保存；

(2)制备壳聚糖；

(3)把1-2份体积表皮生长因子培养液和1-2份体积的3％壳聚糖混悬液混合即成成品。

本发明的利用培养液治疗糖尿病创伤的外用药的制备方法，所述壳聚糖的制备步骤如下：

(1)新鲜或陈旧虾壳经挑检剔除杂质后用适量3％HCl浸泡过夜，用自来水漂洗至残液PH6.5-7.0；

(2)加入适量3％NaOH溶液煮沸2小时，弃洗涤液用自来水冲洗虾壳残液至中性；

(3)在碱洗过的虾壳中加入0.2％的高锰酸钾煮沸20分钟，弃高锰酸钾反应液，用自来水冲洗数次；

(4)在高锰酸钾着色的虾壳中加入适量5％草酸溶液，加热至虾壳全部脱色为止，依次分别用自来水和蒸馏水冲洗干净；

(5)将脱色后的虾壳用3-4倍体积的40％NaOH在110℃控温下煮沸反应4-6h，趁热过滤，弃反应液；用自来水冲洗虾壳至中性，再用蒸馏水冲洗数次，在50℃烘干收藏备用。

本发明的发明者在利用水囊引产人胎胰岛细胞异体生物移植治疗糖尿病的研究课题中发现人胎腺体细胞经体外培养可释放出多种活性天然肽物质，其主要成分之一为HEGF，该物质可刺激皮肤细胞的生长与修复。海洋生物壳体组织的提取物甲壳素及其改性衍生物壳聚糖具有一系列优良的理化性能和药物功效，它具有很强的生物兼容性：其分子中的氨基和羟基与生物大分子蛋白质、氨基酸、核酸、酶类具有很好亲合性。壳聚糖对创伤的促愈作用已有专门报道。另据报道它还具有抑癌效应和免疫活性。毒理研究还证实壳聚糖无热源反应；无皮肤刺激反应；无皮肤致敏反应；无全身过敏反应；对眼结膜及角膜无刺激性；与生物材料亦无溶血反应。壳聚糖优良的药理功能和安全性在研究和实践的广泛领域获得公认。本发明将哺乳动物幼仔腺体组织经体外培养所获多肽活性因子与壳聚糖加以优化兼容，使两者在不同作用机制下刺激细胞生长，促进创伤愈合的相同功效达到协同强化效果。将本品试用于糖尿病及各种创伤治疗，促愈效果优于常规治疗，对其它溃疡性皮肤损伤亦同样收到满意疗效。