[发明专利]检测猪瘟病毒的方法和试剂盒、从疫苗菌株中区别感染性菌株的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于检测猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)的试 剂盒，该试剂盒包括一个探针、一对引物以及一对SNP(单核苷酸多态性)引 物，此外本发明还涉及一种用于鉴定CSFV的多聚核苷酸和磁珠探针(Magbeads probe)。

背景技术

猪瘟(CSF)或猪霍乱是一种家猪和野猪的高传染性疾病。该疾病会导致发 热、皮肤损伤及抽搐，且通常导致动物(特别是幼仔)在15天内死亡。其症状 与非洲猪瘟的症状难以区分。该疾病流行于亚洲大部分地区、中美洲及南美洲 以及欧洲和非洲的部分地区。人们之前认为，在英国猪瘟已于1966年被消灭(根 据环境、食品和农村事物部报告)，但该疾病在2000年东安格利亚又一次爆发。 根据美国农业部的报告，在美国猪瘟已于1978年被消灭。其它地区，包括澳大 利亚、加拿大、爱尔兰、新西兰以及斯堪的纳维亚都被认为没有猪瘟。虽然猪 瘟不会在人类引起食源性疾病，但是如果该疾病在任何国家再次发生，都会对 猪肉生产者造成巨大的经济损失。

健康猪和感染了霍乱的猪的直接接触是最常见的传染方法。该疾病还可通 过接触感染动物的身体分泌物以及排泄物而被传染。健康猪接触到受污染的交 通工具、猪圈、饲料或者衣饰，都有可能感染疾病。鸟类、昆虫类和人类可以 实现将病毒从感染猪携带到健康猪的物理传播。养猪人通过给他们的猪群喂食 含有猪油渣的未经过处理的食物废料也会无意中导致感染。

猪霍乱的临床症状随感染的程度而有所不同。疾病的形式分为三种：急性、 慢性和轻微性。

急性猪霍乱是高致命性的，它引发的持续高热可以使体温升高到107℉。急 性猪霍乱的另一个症状是抽搐和缺乏食欲。受感染的猪会聚堆或挤作一团。猪 霍乱症状在感染后的几天内可能表现得不明显。通常，动物在发病后的5到14 天内死亡。

慢性猪霍乱与急性猪霍乱的临床症状相似，但没有急性症状剧烈。常发现 腹腔皮肤变色、耳及四肢周围出现红斑。感染了慢性猪霍乱的猪在发病后可以 活过100天。

轻微性猪霍乱或临床症状不明显的猪霍乱很少引发显著的临床症状。感染 的猪在经历短期的疾病之后会有一段恢复期。但最终还是会复发。轻微性猪霍 乱可以引起猪崽个体小，死产以及其他生殖疾病。断乳期的高死亡率也显示了 轻微性猪霍乱的发生。

猪瘟是最具破坏性的猪疾病。抑制和最终消除猪瘟需要调查疾病形成和传 播的原因，同时还需要有关诊断和预防方法的信息。

猪瘟的感染源是黄病毒科(或披膜病毒科)瘟病毒属的CSFV(以前称作猪 瘟病毒)病毒。CSFV与主要感染牛的牛病毒性腹泻(BVDV)和边界病(BDV) 的反刍动物瘟病毒有很密切的关系。

不同的CSFV株病毒作用不同，导致了广泛的临床症状。高致病菌株与急 性、明显的疾病和高死亡率有关，包括神经学症状和皮肤出血。低致病菌株可 以导致亚急性和慢性疾病的传染，这种类型的传染不易被检测到，但仍然会升 高胎儿和新生儿的死亡率。受感染但临床症状不明显的母猪生下受感染的小猪， 从而维持了疾病的流行。其它症状包括嗜睡、发热、免疫抑制及次级呼吸道感 染。CSFV的潜伏期为2到14天，而症状可能会在2到4周后才明显出现。急 性感染的动物在最终死亡前可存活2到3个月。

根除CSF是有难度的。目前的方案主要围绕快速检测和诊断，以及预防性 的剔除和其后可能采取的紧急接种措施。维持和引入传染的传染源可能包括猪 和猪肉产品的广泛运输，还有野猪和野猪种群的地方性CSF。

用减毒的活猪瘟病毒(CSFV)疫苗株的“中国”菌株-LPC(也称作C-菌株) 接种猪，能保护猪不受CSF感染。使用传统疫苗(例如，LPC)接种猪的主要 缺点在于，这些接种了的猪与受CSFV野生株感染的猪在血清学上无法区别开 来。然而，LPC被认为是最安全、有效的活疫苗之一。因此，能够鉴别疫苗株 和能感染的致病菌株将是很大的进步。

瘟病毒的基因组由一条约12.5kb的RNA分子的正链组成。然而，若干非致 细胞病变的BVDV菌株的正链RNA分子基因组可能相当的大。