[发明专利]一种具有趋化作用的人类RANTES蛋白的异源表达和纯化方法

权利要求书

1.一种具有趋化作用的人类RANTES蛋白的异源表达和纯化方法  其特征在于 该方法包括以下步骤：

(1).人RANTES基因的克隆

根据人类RANTES基因序列设计引物，以人体血液提取RNA为模板，RT-PCR 方法扩增人类RANTES基因片段，并连接到pMD18-T载体上形成重组质粒 pMD18-T/rantes；

(2).人RANTES融合蛋白表达载体的构建

在人RANTES蛋白N端融合6×His纯化标签，并在His-tag和RANTES蛋白 之间加入肠激酶酶切位点，以重组质粒pMD18-T/rantes为模板，PCR扩增出人 类RANTES融合蛋白基因，将该融合蛋白基因与毕赤酵母载体pPIC9K质粒重组构 建表达质粒pPIC9K/rantes，构建策略见图2，所述人RANTES融合蛋白的基因序 列如SEQ ID NO：2所示；

(3).人类RANTES融合蛋白的诱导表达和分离纯化，表达系统的宿主为毕 赤酵母GS115；

电转化表达系统的宿主，经G418筛选得到高表达的阳性克隆，在摇瓶中 融合蛋白高效、分泌性表达；然后采用超滤和亲和层析纯化人类RANTES融合 蛋白；

(4).人RANTES蛋白的分离纯化

利用肠激酶酶切人类RANTES融合蛋白，然后经亲和层析去除6×His-tag， 纯化到人类RANTES蛋白。