[发明专利]一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗及制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物疫苗的开发，尤其涉及一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗及制备方法。

背景技术

肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7是肠出血性大肠杆菌的一个主要血清型，感染该菌可使人患腹泻、出血性结肠炎、也可引发溶血性尿毒综合征及血小板减少性紫癜等并发症，严重者可导致死亡。自1982年被确定为致病菌的20多年间，世界各地已发生了多起O157的暴发流行，表明O157:H7的感染已成为一个全球性的公共卫生问题。然而目前缺乏有效的防治方法，研究证实抗生素可促使O157菌释放致死性志贺毒素(Stx)，从而使患者并发溶血性尿毒综合症的危险性增加，因此，研制O157疫苗对预防和控制O157感染有着极其重大的意义。

EHEC O157:H7的致病性主要体现于细菌在宿主体内的粘附定植和产生毒素两个方面。粘附与定植是细菌感染的第一步。紧密粘附素(Intimin)是一种分子量约为96KD的跨膜蛋白，也是O157菌重要而特异的粘附分子。细菌主要通过Intimin及其受体(转位紧密粘附素受体，Tir)的相互作用粘附于肠上皮细胞，引起擦拭性(A/E：attaching/effacing)损伤。Intimin的膜外区(C端片段IntiminC)是与Tir受体结合的功能区。有实验指出Intimin及IntiminC的特异性抗体均可以阻断细菌的粘附进而使其丧失致病力，具有较强的免疫保护性(Aleksic.S，H.Karch，J.BockemuhI，et al.A biotyping scheme for Shia-like(Vero)toxin-producing Escherichia coli O157 and a list of serological cross-reactionsbetween O157 and other Gramnegative bacteria.Int.J.Med.Microbiol.1992：276：221-230)。而引起和介导O157细菌粘附定植的主要结构单元EHEC III型分泌系统(type-III secretion system，TTSS)的分泌蛋白EspA(Esp为E.coli secreted protein缩写)可以在细菌表面形成管状结构，是多种效应蛋白及Tir进入宿主细胞的通道，同时也参与A/E损伤形成时信号的传递。有研究表明EspA具有良好的免疫原性和免疫保护性。此外，EHEC O157:H7主要产生两种毒素，分别称为志贺毒素I(Stx1)和志贺毒素II(Stx2)(Paola Marcato，George Mulvey，Randy J.Read，etal.Immunoprophylactic Potential of Cloned Shiga Toxin 2B Subunit.J InfectDis.2001；183：435-443)。在细菌体内，Stx2为分泌型表达，Stx1为胞内表达。两种毒素均由1个A亚单位和5个B亚单位组成，A亚单位具有细胞内毒性，能与28S rRNA作用导致蛋白质合成停止，是大肠杆菌O157:H7引起临床表现的病理基础；B亚单位具有细胞结合特性，能与特定受体(Gb3)的细胞结合，从而引导A亚单位发挥作用。志贺毒素(Stx)一方面直接杀死肠绒毛表面的上皮细胞，另一方面由Stx引起的肠上皮损伤以LPS、炎性因子能促进Stx穿越肠上皮细胞进入血液循环造成肠道、中枢神经系统及Gb3受体含量较高的器官的损伤。多数O157:H7细菌产生Stx2，其毒性强于Stx1，与溶血性尿毒综合征(HUS)及血栓形成性血小板减少性紫癜(TTP)等严重并发症的相关性更为密切，因此Stx2是该菌致病性的重要物质基础。Paola Marcato等克隆表达了志贺样毒素II结合亚单位(Stx2B)并探索了其免疫保护性，发现Stx2B无毒，且具有良好的免疫保护性，针对Stx2B的单克隆抗体具有阻断毒素的作用(Paola Marcato，George Mulvey，Randy J.Read，et al.Immunoprophylactic Potential of Cloned Shiga Toxin 2BSubunit.J Infect Dis.2001；183：435-443)。