[发明专利]一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗及制备方法

权利要求书

1.一种重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗，其特征在于包含抗原亚单位EspA、IntiminC300和Stx2B。

2.根据权利要求1所述的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗，其特征在于所述的抗原亚单位EspA、IntiminC300和Stx2B来源于肠出血性大肠杆菌O157:H7。

3.一种权利要求1的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1)通过PCR方法获得融合基因EspA-IntiminC300、EspA-IntiminC300-Stx2B；

2)融合基因分别与表达载体连接，得到重组表达质粒；

3)重组表达质粒转化第一中间宿主菌株，获得重组子；

4)重组子转化第二中间宿主菌株，鉴定阳性重组子；

5)步骤4)中鉴定正确的阳性重组子转化终宿主菌株；

6)诱导表达，得到重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗；

7)鉴定步骤6)中得到的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗中EspA、IntiminC300、Stx2B的表达；

8)检测步骤6)中得到的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗中EspA、IntiminC300、Stx2B的免疫原性；

9)重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗攻毒保护实验；

10)在有、无选择压力的情况下进行体外传代培养，鉴定重组减毒鼠伤寒沙门氏菌载体疫苗稳定性。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤1)中通过PCR方法获得EspA-IntiminC300时使用的PCR引物如SEQ ID NO：1-2所示。

5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤1)中通过PCR方法获得EspA-IntiminC300-Stx2B时使用的PCR引物如SEQ ID NO：3-4所示。

6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤2)中所述的表达载体为pYA3149。

7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤3)中所述的第一中间宿主菌株为大肠杆菌X6097。

8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤4)中所述的第二中间宿主菌株为减毒鼠伤寒沙门氏菌X3730。

9.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤5)中所述的终宿主菌株为减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于所述的减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550为asd基因缺陷型菌株。

11.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于步骤8)中通过Western免疫印迹检测EspA、IntiminC300、Stx2B的免疫原性。