[发明专利]一种新的细胞悬浮培养生产重组人促红细胞生成素的方法

权利要求书

1.一种细胞悬浮培养重组人促红细胞生成素的方法，其特征在于，该方法包括 如下步骤：

(1)从细胞库中复苏一支重组人促红细胞生成素细胞株，用DMEM培养基加 10％胎牛血清传代两次，当细胞处在对数生长期时，用胰蛋白酶消化，加血清终 止消化，1000rpm，离心5分钟，去上清，加入无血清培养基，把细胞制成悬液， 接种到无菌摇瓶中，每瓶培养基体积为50毫升，接种细胞密度为3×10⁵个细胞 /毫升，摇床速度为200rmp，当细胞密度达到2～3×10⁶细胞/毫升，按1∶3传 代，传代5～6次时，当细胞在无血清培养基中生长的速度，与在含有血清培养 基中生长的速度接近时，冻存细胞，作为种子细胞，

(2)对激流式生物反应器的袋子进行咖吗射线消毒，加入无血清培养基10L， 并接种种子细胞，接种密度为4×10⁵个细胞/毫升，在37度，转速为200rmp下 进行培养，流加浓缩的无血清培养基，每天测糖，保证糖含量在0.5-1g/L，培 养5-8天后，细胞密度可以达到3-8×10⁷细胞/毫升，继续培养2-3天收获上清， 纯化收获重组人促红细胞生成素。