[发明专利]一种中国被毛孢生理小种的发现及工艺优化

说明书

(一)技术领域

本发明涉及优良中国被毛孢生理小种的筛选及其产业化方法改进。

(二)背景技术

冬虫夏草与人参、鹿茸同被誉为中国三大宝，有“百药之王”的美称，被历代医家称为“理诸虚百损之圣药”。近年来，由于冬虫夏草价格持续上涨，而冬虫夏草产量又在逐渐下降，市场上出现了各种各样的假冬虫夏草和假冬虫夏草制品，真伪难辨。如何鉴别冬虫夏草？如何使冬虫夏草真正产业化，来解决市场的供不应求，缓解采挖冬虫夏草带来严重的环境污染，成为了人们日益关注的问题。

虫草属有497种，中药冬虫夏草只是其中的一种，拉丁名全称为Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.，是以虫草蝙蝠蛾幼虫为宿主并长成虫型菌核和草型子座的复合体(子座是高等真菌的有性器官)。冬虫夏草产业化首决条件是确切分离到冬虫夏草菌。2005年10月29日，中国菌物学会在北京召开了“冬虫夏草及其无性型研讨会”，与会专家就冬虫夏草菌及其无性型科学名称的正确使用一致做出了下列结论：

1.冬虫夏草菌的拉丁学名是Cordyceps sinensis，其无性型是中国被毛孢，国际承认的无性型拉丁学名为：Hirsrtella sinensis Liu，Guo，Yu etZeng(1989)。冬虫夏草头孢(Cephalosporium dongchongxiacaonia)、蝙蝠蛾被毛孢(Hirsutella hepiali)、中华束丝孢(Synnema tium sinense)为中国被毛孢的同种异名，且系不合格发表名称，不为国际所承认。

2.中国拟青霉(Paecilomyces sinensis Chen，1984)不是冬虫夏草菌的无性型，而是不同于冬虫夏草菌的另一种真菌，其有性型名称尚不明确。

3.蝙蝠蛾拟青霉(Paecilomyces hepiali Chen et Dai，1989)不是冬虫夏草菌的无性型，而是不同于冬虫夏草菌的另一种真菌，其有性型名称尚不明确。

此外，虽然下列菌种均未被纳入上述实验过程，但是，至灵胶囊生产菌被孢霉属真菌，在亲缘关系上是和子囊菌相距甚远的结合菌门的成员，因此，与冬虫夏草菌无关。标明为“人工冬虫夏草菌丝粉”的心肝宝胶囊的生产菌“粉红胶霉”则是一种真菌寄生菌；其胶霉属(Gliocladium Corda)是肉座菌科(Hypocreaceae)小灿球赤壳菌属(Sphaerostibella)的无性型，也不是冬虫夏草菌。根据上述分析，无论是至灵胶囊、宁心宝胶囊或心肝宝胶囊的生产菌均非冬虫夏草菌的无性型。

以中国被毛孢为菌种发酵生产制品的出现(如百令胶囊)，不但有效缓解了冬虫夏草市场供需矛盾，延缓草原环境恶化，而且使冬虫夏草变得有名但不再昂贵，能让更多的老百姓享用得起。但是也存在许多不足，人们使用人工冬虫夏草制品后容易上火，少数产生胃肠道不良反应，而天然冬虫夏草性温平，几乎很少发生，所以人工冬虫夏草制品在疗效上与天然冬虫夏草存在一定的距离；另外，人工冬虫夏草发酵废液的排放对环境也造成比较大的污染。解决这些问题，一方面需要从优良菌种的筛选着手，另一方面从发酵工艺上进行改进。

本发明就是发现一种优良中国被毛孢生理小种及其产业化方法的改进。

(三)发明内容

本发明使用细胞学动态信息分析筛选出了一种中国被毛孢生理小种，并通过改进其产业化工艺，所得产物与青藏高原那曲、玉树产的冬虫夏草从A549、RBL等细胞捕获细胞学动态信息的集成数据相同。

为达到发明目的本发明采用的技术方案是：

1.构建天然冬虫夏草标准化细胞动态信息图谱

1.1天然冬虫夏草提取

称取不同产地冬虫夏草0.09g，加1mL纯净水，浸泡30分钟，超声10分钟，沸水加热20分钟，离心，取上清液备用。

2.2提取液介入细胞培养

取不同产地冬虫夏草提取液10uL，加入铺有10³～10⁴个/孔细胞的相对应孔内，使用市售仪器获取细胞学动态信息，建立冬虫夏草标准细胞动态信息图谱。

2.中国被毛孢菌种筛选

2.1中国被毛孢菌丝体提取

称取中国被毛孢菌丝体0.09g，加1mL纯净水，浸泡30分钟，超声10分钟，沸水加热20分钟，离心，取上清液备用。

2.2提取液介入细胞培养