[发明专利]红景天及红景天苷在干细胞定向分化为肝系细胞中的应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及红景天尤其是红景天苷在诱导干细胞定向分化为肝系细胞中的应用。

(二)背景技术

红景天系景天(Crassulaceae)科红景天属(Rhodiola L.)植物，为多年生草本或亚灌木植物，主要分布在北半球的喜马拉雅山区、亚洲西北部和北美洲海拔在1,600～4,000米的地区。红景天药用历史悠久，素有“黄金人参”“神仙草”之称。药典记载红景天为景天科植物大花红景天的干燥根及根茎，其性甘、苦、平，益气活血、通脉平喘，可用于气虚血瘀、胸痹心痛、中风偏瘫和倦怠气喘。现代药理研究表明，红景天的生物活性与其所含的多种化学成分密不可分。

红景天苷(salidroside)是从红景天中分离提纯的天然产物，为一种单体化合物，是红景天的有效成分之一，部分相关科属中药也含红景天苷，其化学结构式为：

红景天苷单体的分离纯化方法：红景天粉为原料，以水为溶剂用微波法提取红景天苷。最佳工艺参数为：液固比20∶1，浸泡时间1.5h，低功率微波处理60s，磁力搅拌15min，提取2次，提取率可达90％(参见：微波辅助提取红景天苷，赵武奇殷涌光梁歧等，食品与发酵工业，2004，30(2)，19～22)。

药理作用：

提高和改善抗各种高原反应能力。

抗缺氧、抗疲劳作用。研究表明它通过维持5-HT含量正常化起到了抗中枢疲劳的作用。

抗衰老。具有抗氧化作用及体外清除羟自由基和超氧阴离子自由基的能力。

抑制大鼠肾小管上皮细胞及间质细胞向肌成纤维细胞转化，有效缓解肾间质损伤，防治肾间质纤维化。

抗肝纤维化作用。红景天苷可明显抑制乙醛刺激的HSC增殖及胶原基因的表达，在体外有显著的抗肝纤维化作用。

对心脑血管的保护作用。红景天苷可抑制大鼠缺血再灌注引起的白细胞介素1β表达的增加，减少脑缺血再灌注后脑组织中TNF-α的表达起到保护脑血管的作用；通过抑制血管ACE的表达，在一定程度上可抗心肌缺血。

提高机体免疫能力、抗肿瘤、抗病毒。

抗辐射。红景天苷有防护X射线辐射损伤机体组织和细胞膜的作用。

提高记忆力和防治老年痴呆，保护神经细胞。红景天苷可抑制缺氧缺糖损伤所致的线粒体膜电位和活性的降低，从而具有稳定线粒体膜电位的作用，抑制神经细胞凋亡的发生；体外促进神经干细胞向神经元方向分化为红景天药物用于相关神经系统疾病的临床治疗提供了实验依据。

降血糖和改善蛋白质、脂肪代谢。

目前还未有红景天及红景天苷具有诱导成体干细胞定向分化为肝系细胞的作用报道。

(三)发明内容

本发明目的是提供红景天及红景天苷的新用途，即红景天及红景天苷诱导干细胞定向分化为肝系细胞的应用。

本发明的技术方案是：

红景天在制备诱导干细胞定向分化为肝系细胞诱导剂中的应用，如利用红景天诱导干细胞定向分化为肝系细胞(如肝细胞，胆管细胞等)。

本发明推荐以红景天中的有效成份红景天苷作为诱导成体干细胞定向分化为肝系细胞的诱导剂。红景天苷具有拟肝细胞生长因子(Hepatocyte grow factor，HGF)样作用。

通常的，本发明所述的干细胞为成体干细胞，所述的成体干细胞包括除造血干细胞外的骨髓间充质干细胞以及多种祖细胞，优选为骨髓间充质干细胞。

本发明所述应用为：将红景天苷与细胞生长因子FGF-4组合作为诱导剂用于诱导骨髓间充质干细胞定向分化为肝系细胞。

具体的，所述应用为：取大鼠骨髓间充质干细胞进行传代培养，取稳定传代的骨髓间充质干细胞于诱导培养基中，进行诱导培养，获得成熟肝细胞样细胞；所述诱导培养基为添加有红景天苷与细胞生长因子FGF-4的基础培养基，所述基础培养基中红景天苷与细胞生长因子FGF-4添加量为：红景天苷终浓度为1～5μM(优选为2μM)，细胞生长因子FGF-4终浓度为5～20ng/mL(优选为10ng/mL)。

优选的，所述的应用为：取大鼠骨髓间充质干细胞，进行传代培养，取第3代的骨髓间充质干细胞，接种于MSC培养基，37℃、5％CO2条件下培养至细胞汇合率大于90％，将细胞培养基更换为添加有2μM红景天苷与10ng/mL细胞生长因子FGF-4的基础培养基，诱导培养14天，得到成熟肝细胞样细胞。