[发明专利]甘蔗宿根矮化病菌的检测方法

权利要求书

1、一种甘蔗宿根矮化病菌的检测方法，其特征在于按如下步骤进行：

1)、制样和组织印迹：取甘蔗中下部茎节，切成9～11cm长，取中间部分将其横切成平面，将切面在硝酸纤维素膜上垂直点压10～15秒，获得印迹斑；

2)、封闭：将封闭缓冲液倒入装有硝酸纤维素膜的培养皿里，37℃下孵育45min，倒去培养皿里封闭缓冲液，加入TBST缓冲液，使硝酸纤维素膜浸入其中，轻轻转动几下，再弃去TBST缓冲液；

3)、加抗体：把硝酸纤维素膜浸入含0.1％甘蔗宿根矮化病特异性抗血清和1％脱脂奶粉的TBST缓冲液中，37℃下孵育2h，再用TBST缓冲液洗膜3次，每次3min；

4)加酶标抗体：把硝酸纤维素膜浸入含0.01％碱性磷酸酶标记抗体和1％脱脂奶粉的TBST缓冲液中，37℃下孵育2h，用TBST缓冲液洗膜4次，每次3min；

5)加底物显色：把硝酸纤维素膜转入底物/缓冲液BCIP/NBT二片加20ml双蒸水溶解中显色5～10min，取出后用蒸馏水冲洗，自然干燥；

6)结果判别：肉眼观察或显微镜观察判别，感染甘蔗宿根矮化病菌的样品组织斑上呈紫红色，不感染的组织斑上不显色。

2、根据权利要求1所述的甘蔗宿根矮化病菌的检测方法，其特征在于TBST缓冲液由PH8.0的Tris-HCl6.05g+NaCl 2.92g+1000ml双蒸水，再按重量计加入0.5ml Tween20。

3、根据权利要求1所述的甘蔗宿根矮化病菌的检测方法，其特征在于封闭缓冲液为TBST中按重量计加入5％脱脂奶粉。

4、根据权利要求1所述的甘蔗宿根矮化病菌检测方法，其特征在于所用的酶标抗体为羊抗兔碱性磷酸酶标记抗体Goat Anti Robbit。

5、根据权利要求1所述的甘蔗宿根矮化病菌的检测方法，其特征在于所用的底物BCIP/NBT是5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸/氮蓝四唑。