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[发明专利]一种用于检测甘蔗褐条病病原菌狗尾草平脐蠕孢菌的引物组、试剂盒及方法-CN202211637062.4在审
发明人：李婕;黄应昆;王晓燕;李文凤;李银煳;张荣跃;单红丽 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2022-12-19 - 公布日： 2023-03-14 - 主分类号： C12Q1/6895 文献下载
摘要：本发明属于农作物病害检测和鉴定技术领域，提供了一种用于检测甘蔗褐条病病原菌狗尾草平脐蠕孢菌的引物组、试剂盒及方法；所述引物组包括上游引物和下游引物；所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；本发明所述含有检测引物组的试剂盒具有特异性强、灵敏度高、准确度高、高效快捷等优点，操作简便，检测所需时间短，与狗尾草平脐蠕孢菌同属其他种无交叉反应，也与其他常见甘蔗病原菌无交叉反应，为甘蔗褐条病早期诊断检测提供技术支撑，对病害的及早防控具有重要意义，具有较好应用前景。
一种用于检测甘蔗褐条病病原菌狗尾草平脐蠕孢菌引物试剂盒方法

[发明专利]一种甘蔗白叶病植原体基因组DNA的纯化方法-CN202210627419.4有效
发明人：张荣跃;黄应昆;李婕;王晓燕;单红丽;李银煳 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2022-06-02 - 公布日： 2022-11-29 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种用于基因组测序的甘蔗白叶病植原体基因组DNA纯化方法。本发明通过研磨裂解甘蔗叶片细胞释放甘蔗白叶病植原体，通过多次重悬去除大量释放的寄主DNA，根据甘蔗白叶病植原体菌体大小，使用优化的过滤方案除去寄主细胞并获得甘蔗白叶病植原体，使用DNA酶去除残余的寄主DNA，最后提取甘蔗白叶病植原体DNA。本发明提供了一种简便、快速的甘蔗白叶病植原体基因组DNA的纯化方法，不需要昂贵的设备和试剂，方便快捷，获得的甘蔗白叶病植原体基因组DNA满足高通量基因组测序要求。
一种甘蔗白叶病植原体基因组 dna 纯化方法

[发明专利]一株阿洛杰链霉菌BC1及其应用-CN202210559397.2有效
发明人：李婕;黄应昆;王晓燕;张荣跃;单红丽;李银煳;李文凤 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2022-05-19 - 公布日： 2022-11-15 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明涉及植物病害生物防治技术领域，尤其涉及一株阿洛杰链霉菌BC1及其应用。本发明提供了一株阿洛杰链霉菌BC1，拉丁文名为Streptomycesaraujoniae；保藏编号为CGMCC No：24639。本发明从甘蔗叶片中成功分离获得一株阿洛杰链霉菌菌株BC1，其用于防治甘蔗真菌病害，对甘蔗梢腐病菌、甘蔗赤腐病菌、甘蔗褐条病菌和甘蔗叶枯病菌等甘蔗病原菌有明显的抑制效果，尤其是甘蔗赤腐病菌具有良好的效果，具有较好的开发应用前景。本发明提供的阿洛杰链霉菌菌株BC1发酵培养基制备方法简单，成本低。
一株阿洛杰链霉菌 bc1 及其应用

[发明专利]一种甘蔗褐条病病原菌快速大量产孢的培养方法-CN202110718073.4在审
发明人：单红丽;黄应昆;高三基;张慧丽;王长秘;李婕;王晓燕;张荣跃;李银煳 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2021-06-28 - 公布日： 2021-09-10 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种甘蔗褐条病病原菌快速大量产孢的培养方法，属于植物病原菌诱导产孢技术领域，首先配制产孢培养基，主要成分为燕麦片，琼脂粉和超纯水，然后将活化好的甘蔗褐条病病原菌接种于产孢培养基上，28℃恒温暗培养，菌落长至直径5cm时用无菌棉签刮除气生菌丝，28℃恒温再暗培养7天，用无菌水洗脱分生孢子，显微镜下计量孢子数。采用本发明对甘蔗褐条病病原菌进行培养，可以大大提高甘蔗褐条病病原菌产孢效率，具有菌落生长快，产孢量大，操作简单等优点，缩短了甘蔗褐条病抗性品种鉴定周期，节约了人力物力，具有较高的应用价值，并为甘蔗褐条病病害发生规律和防控手段的深入研究提供科学、有效的技术支撑。
一种甘蔗褐条病病原菌快速量产培养方法

[发明专利]一种甘蔗白叶病植原体传播媒介的测定方法-CN202010075850.3有效
发明人： 黄应昆;张荣跃;单红丽;王晓燕;李婕;尹炯;王长秘;罗志明;仓晓燕 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2020-01-22 - 公布日： 2021-08-10 - 主分类号： A01G7/00 文献下载
摘要：一种甘蔗白叶病植原体传播媒介的测定方法，包括：选择甘蔗白叶病发生区轮作1年以上田块；采用感病品种经检测筛选感染白叶病植原体、没有感染白叶病植原体的植株作带毒蔗种蔗种和无毒蔗种；同田块分成三墒，其中一墒安装传播媒介测定田间装置，该装置内种植无毒蔗种，另两墒分别种植带毒蔗种和无毒蔗种，调查发病情况；新植甘蔗测定结束砍收留宿根测定；根据带毒、无毒蔗种，新植、宿根甘蔗在装置内外病情，系统分析明确甘蔗白叶病植原体的传播媒介。本发明方法首次建立了一套简便、系统性测定甘蔗白叶病植原体传播媒介的有效方法，为甘蔗白叶病有效防控提供了理论指导和科学依据，测定结果客观、真实、可靠。
一种甘蔗白叶病植原体传播媒介测定方法

[发明专利]一种新植甘蔗白叶病抗病性精准鉴定方法-CN201811511013.X有效
发明人： 黄应昆;李文凤;张荣跃;单红丽;王晓燕;李婕;罗志明;尹炯;仓晓燕 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2018-12-11 - 公布日： 2020-12-22 - 主分类号： C12Q1/18 文献下载
摘要：一种新植甘蔗白叶病抗病性精准鉴定方法，包括：切取感染了甘蔗白叶病植原体蔗茎榨汁，加10倍量无菌水配制接种液；参试甘蔗材料蔗茎切成带芽茎段，流动自来水浸泡48h，50℃热水处理2h，杀虫杀菌药剂浸种10min；塑料薄膜包衣接种25℃下保湿24h；接种材料种植在塑料桶内置20‑30℃防虫温室培养；调查病株率，按1‑5级分级标准进行抗病性评价。本发明方法首次创建了一套精准高效的新植甘蔗白叶病抗性鉴定方法，为甘蔗抗白叶病育种提供了技术支撑；通过病原接种液喷洒蔗种塑料薄膜包衣接种，具备发病生境条件，结果客观、真实、可靠；接种快速简便，可操作性强、工效高，接种后甘蔗白叶病发病显著、灵敏度高、重现性好。
一种甘蔗白叶病抗病性精准鉴定方法

[发明专利]一种宿根甘蔗白叶病抗性的精准鉴定方法-CN201910042437.4有效
发明人： 黄应昆;李文凤;单红丽;王晓燕;张荣跃;李婕;仓晓燕;罗志明;尹炯 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2019-01-17 - 公布日： 2020-11-17 - 主分类号： C12Q1/18 文献下载
摘要：本发明公开一种宿根甘蔗白叶病抗性的精准鉴定方法，包括：供试甘蔗材料处理与种植、接种液配制、切茎接种法接种、病情调查、抗病性评价。本发明方法首次创建了一套简便高效的宿根甘蔗白叶病抗性的精准鉴定方法，为抗白叶病育种提供了技术支撑；其接种方法采用切茎接种法，与自然传播相似，具备发病生境条件、发病均匀，结果客观、真实、可靠；接种方法快速简便，可操作性强、接种工效高。接种后甘蔗白叶病发病显著、灵敏度高、重演性好。
一种宿根甘蔗白叶病抗性精准鉴定方法

[发明专利]一种快速获得大量甘蔗梢腐病病菌分生孢子的培养方法-CN202010308091.0在审
发明人：仓晓燕;黄应昆;张荣跃;王晓燕;单红丽;李婕 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2020-04-17 - 公布日： 2020-07-17 - 主分类号： C12N3/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种快速获得大量甘蔗梢腐病病菌分生孢子的培养方法。培养基配方：KH2PO4 1g/L，KNO3 1g/L，蔗糖0.5g/L，维生素B1 3mg/L，维生素B2 1.5mg/L，维生素B6 0.2mg/L，烟酰胺10mg/L，泛酸钙1mg/L，维生素C 100mg/L。取甘蔗梢腐病病菌分生孢子或菌丝放入上述液体培养基200rpm，27℃±2℃培养3d，离心后用蒸馏水重悬，即获得大量梢腐病菌分生孢子。本发明产孢量多、产孢速度快，有效解决了甘蔗梢腐病病菌培养过程中产孢少的问题。
一种快速获得大量甘蔗梢腐病病菌分生孢子培养方法

[发明专利]一种同时检测四种甘蔗种传性病毒的多重PCR方法及其引物和试剂盒-CN202010000522.7在审
发明人：王晓燕;黄应昆;李婕;单红丽;张荣跃;仓晓燕;尹炯;罗志明 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2020-01-02 - 公布日： 2020-04-03 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：一种同时检测四种甘蔗种传性病毒的多重PCR方法及其引物和试剂盒，通过对四种甘蔗种传性病毒，即斐济病病毒、甘蔗线条花叶病毒、高粱花叶病毒和甘蔗花叶病毒的引物优选，以及对引物浓度，PCR扩增条件等的优化，建立了一种能同时检测四种甘蔗种传性病毒的多重PCR方法。本发明不需克隆、测序和序列比对，一次PCR反应即可同时检测出上述四种病毒，检测结果可靠、准确、特异性强，可用于甘蔗斐济病和花叶病的精准有效诊断，为科学有效防控上述病毒病害和甘蔗引种检疫提供了关键技术支撑，对确保我国甘蔗生产安全具有重要意义。
一种同时检测甘蔗性病多重 pcr 方法及其引物试剂盒

[发明专利]同时检测甘蔗花叶病3种病原的一步法多重RT-PCR检测方法-CN202010007660.8在审
发明人：单红丽;黄应昆;王晓燕;李婕;张荣跃;仓晓燕;尹炯;罗志明 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2020-01-05 - 公布日： 2020-04-03 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：一种同时检测甘蔗花叶病3种病原的一步法多重RT‑PCR检测方法，通过对甘蔗线条花叶病毒、高粱花叶病毒和甘蔗花叶病毒的特异性引物，以及特异性引物浓度、酶用量和退火温度等的优化，建立了通过一次RT‑PCR反应能使3种病原的反转录和PCR扩增在同一反应管中，同一反应条件下一步同时完成的多重RT‑PCR检测方法，操作步骤简单，避免了常规RT‑PCR的重复检测或两步法多重RT‑PCR反应步骤、程序比较复杂、耗时长、交叉污染。该方法具有简便、高效、特异性强，灵敏度高等特点，可用于甘蔗脱毒健康种苗的生产和应用、种质交换和引种检疫，对防控甘蔗花叶病的扩散蔓延具有重要意义。
同时检测甘蔗花叶病病原一步法多重 rt pcr 方法

[实用新型]一种背负式甘蔗施药施肥器-CN201920670724.5有效
发明人：罗志明;尹炯;李俊;邓军;黄应昆;张荣跃;单红丽;王晓燕;仓晓燕;李婕 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2019-05-10 - 公布日： 2020-03-03 - 主分类号： A01C15/02 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种背负式甘蔗施药施肥器，包括装料口、箱体、漏料嘴、漏料管、软管、流速阀门和分料器，所述装料口位于箱体的上端，所述箱体为桶状结构，箱体的底部为单峰型底面，所述单峰型底面的两边低、正中高，单峰型底面的两边低凹处各设有一个向外的漏料嘴；每侧的漏料嘴均通过软管与漏料管相连，所述漏料管的出口端连接分料器，所述分料器与漏料管之间设有流速阀门，流速阀门用于调节所施物料数量，分料器用于将物料分散、均匀施用。本实用新型既能减少蔗农劳动强度，又能加快施用进度，同时还能确保施用均匀且对蔗苗、人员和环境安全，对当前甘蔗生产提质增效具有重要意义。
一种背负甘蔗施药施肥

[发明专利]一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法-CN201910076734.0有效
发明人： 黄应昆;李文凤;王晓燕;单红丽;张荣跃;李婕;仓晓燕;尹炯;罗志明 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2019-01-27 - 公布日： 2019-12-31 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：一种构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法，包括：以来源不同的高感褐锈病甘蔗品种作母本×高抗褐锈病不含Bru1基因的甘蔗品种作父本配制组合杂交得到F1代种子，经播种、筛选真实性杂交F1代、种植真实性杂交F1代单株、接种褐锈病病菌、调查发病情况、按9级标准评价抗性、分析真实性杂交F1代群体抗病遗传，选取杂交后代遗传分离群体抗感分离比≈3:1的真实性杂交F1代群体为甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体。本发明方法首次建立了一套系统性构建甘蔗抗褐锈病基因定位遗传分离群体的方法，其程序简化，可操作性强，构建的真实性杂交F1群体抗感分离比≈3:1，其抗病基因由显性单基因控制，可用于抗褐锈病基因定位。
锈病遗传分离群体基因定位真实性构建杂交F1代甘蔗甘蔗品种群体杂交F1代单株父本母本显性单基因标准评价程序简化抗病基因杂交后代组合杂交高抗抗性可用病菌接种抗病配制播种筛选遗传杂交基因种植调查分析

[发明专利]一种甘蔗白叶病植原体不同亚组的PCR-RFLP鉴别方法-CN201910106318.0有效
发明人：张荣跃;黄应昆;李文凤;李婕;单红丽;王晓燕;仓晓燕;罗志明;尹炯 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2019-02-02 - 公布日： 2019-12-03 - 主分类号： C12Q1/683 文献下载
摘要：本发明涉及一种甘蔗白叶病植原体不同亚组的PCR‑RFLP鉴别方法。以甘蔗白叶病植原体tuf基因为对象设计特异性引物，通过PCR扩增得到tuf基因片段，然后采用限制性核酸内切酶Msp I对扩增得到的tuf基因片段进行酶切，通过差异性的RFLP酶切图谱对甘蔗白叶病植原体进行不同亚组的区分。本发明无需测序即可快速、准确、高效的鉴别甘蔗白叶病植原体16SrXI‑B亚组和甘蔗白叶病植原体16SrXI‑D亚组，对甘蔗白叶病的病原鉴定和防控具有重要意义。
植原体甘蔗亚组鉴别限制性核酸内切酶特异性引物病原鉴定对象设计酶切图谱重要意义差异性测序扩增酶切

[发明专利]一种甘蔗白叶病植原体和白条黄单胞菌的双重PCR检测方法及其引物组-CN201910143636.4有效
发明人：张荣跃;黄应昆;李文凤;王晓燕;李婕;单红丽;仓晓燕;尹炯;罗志明 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2019-02-27 - 公布日： 2019-10-18 - 主分类号： C12Q1/689 文献下载
摘要：本发明公开一种甘蔗白叶病植原体和白条黄单胞菌的双重PCR检测方法及其引物组。由甘蔗白叶病植原体引起的甘蔗白叶病和由白条黄单胞菌引起的甘蔗白条病在症状表现上非常相似，目前确诊病害时必须分别检测两种病原。本发明针对甘蔗白叶病植原体tuf基因和白条黄单胞菌rpoD基因分别设计了一对特异性引物，经过条件优化，建立了可以同时检测出甘蔗白叶病植原体和白条黄单胞菌的双重PCR反应体系。应用该方法可以在一次PCR反应中同时检测甘蔗白叶病植原体和白条黄单胞菌，具有快速、特异性、稳定的特点，可用于甘蔗白叶病和甘蔗白条病的快速鉴别诊断，对有效防控这两种病害具有重要意义。
甘蔗黄单胞菌植原体白条双重PCR 检测白条病引物组病害特异性引物病原快速鉴别条件优化症状表现重要意义一次PCR 可用诊断基因应用

[实用新型]一种用于测定甘蔗白叶病植原体传播媒介的田间装置-CN201822105210.3有效
发明人： 黄应昆;李文凤;张荣跃;单红丽;王晓燕;尹炯;罗志明;李婕;仓晓燕 -专利权人：云南省农业科学院甘蔗研究所
申请日： 2018-12-15 - 公布日： 2019-08-20 - 主分类号： A01G13/02 文献下载
摘要：本实用新型公开一种用于测定甘蔗白叶病植原体传播媒介的田间装置。该装置包括长方体框架、固定钢丝绳、顶网、围网、外开门；长方体框架的长度10～30m，宽度10m，高度2m，由多根立柱和横杆相互连接围成；长方体框架内中部沿长度方向间隔设有多根立柱，顶面沿长度方向拉有固定钢丝绳，顶面和四周铺设有顶网和围网，顶网和围网为100‑120目银灰色防虫网，侧面设有外开门。本实用新型结构简单，制作成本低，安装拆卸容易，便于观察，可多次重复使用，具备和满足甘蔗白叶病植原体及其传播媒介生境条件，测定结果客观、真实、可靠，便于同田同步测定分析新植、宿根甘蔗在装置内外的传播媒介、也可用于甘蔗抗白叶病鉴定评价。
传播媒介长方体框架围网甘蔗植原体顶网本实用新型固定钢丝绳多根立柱外开门顶面长度方向间隔田间多次重复生境条件宿根甘蔗同步测定防虫网横杆可用拆卸铺设侧面观察制作分析

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