[发明专利]临床治疗用脐带胎盘间充质干细胞的制备储存和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于临床治疗用的脐带胎盘干细胞，及其制备，储存和应用。具体地说是涉及一种不 同于一般细胞库的方法，而是旨在临床治疗用的脐带和胎盘的干细胞，库，和其制备与储存。

背景

由于干细胞对多种疾病潜在的临床治疗作用，干细胞己被在基础医学试验方法上进行了广泛的研究。 然而由于其基础研究的特性和向临床应用的过度方式的特质，使这些研究在临床治疗用干细胞的制备，储 存和应用方面有所欠缺。并为所储存的干细胞被病原体的污染，和所储存的不同个体干细胞之间的交互污 染留下隐患。从而为这些干细胞的临床应用埋下潜在危险，使这些干细胞丧失临床应用价值。本发明公开 用于临床治疗所用的安全的脐带，胎盘干细胞，和库，以及这些干细胞的制备，储存和应用的方法。

技术背景

近年来有关干细胞的研究日益深化，新的发现已使干细胞在人类与疾病斗争中又增添了全新的武器。 目前，新的干细胞多向性分化(plasticity)的发现是可以将来源于不同组织的干细胞用于器官、组织疾 病的治疗，例如比较容易获得的造血干细胞和间充质干细胞已被广泛应用于不同疾病治疗的研究，比较明 显的结果是有关心血管疾病、神经损伤、代谢疾病的研究。胎盘及脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cell，MSC脐带，胎盘的干细胞)在疾病治疗中的作用已在动物实验和人类疾病的治疗中取得进展和证实。 这些疾病包括Alzheimer病(痴呆症)、脊髓损伤、中风、烧伤、心脏病、糖尿病、骨关节炎和类风湿性 关节炎等。

早期的间充质干细胞的研究立足于对这些细胞的生物特性和功能的研究。其后的一些细胞库的研究则 处于这些研究结果过度之中。由于其基础研究的特性和向临床应用的过度方式的特质，使这些研究在临床 治疗用干细胞的制备储存和应用方面有所欠缺。主要表现为：

1正常分娩时由于胎盘脐带经由有菌的阴道娩出。许多正常分娩的脐带不能得到很好地处理，从而 使这些脐带不能用于干细胞的储存。

2由于有些脐带被病原体污染，所获的一些脐带在培养过程中，细菌，霉菌等繁殖，造成对其它细 胞和其他个体储存物的污染。

3更为严重的是由于目前一般储存中多采用在液氮中浸泡法储存，这样就会使被储存的细胞之间经 由液氮液相的交互污染的危险机会增加。

4在使用有盖的塑料储存管时，由管盖口泄露也对其他标本交互污染的机会大大增加。

以上由于正常分娩的带菌性大大限制了这些个体的脐带，胎盘间充质干细胞的可储存性，甚至这些储 存被仅限于刨腹产者。更为严重的是诸项中的细菌，霉菌，液相交互污染，和储存物从管口外泄导致的交 互污染都会对将来的临床治疗的应用造成巨大的问题。并为所储存的干细胞被病原体的污染，和所储存的 不同个体干细胞之间的细胞，DNA，RNA等的交互污染留下隐患。从而为这些干细胞的临床应用埋下潜 在危险，使这些干细胞丧失临床应用价值。因而目前这些问题是为保证干细胞临床治疗安全性；和使广大 正常阴道分娩孕妇的干细胞也可得到应用所需亟待解决的问题。

本发明的目的就是在于克服以上问题，提供用于临床治疗所用脐带，胎盘干细胞，库和这些细胞的制 备和储存，为临床干细胞的治疗在安全上提供保障。

发明内容

本发明内容的技术方案步骤如下：

1)正常阴道分娩胎盘，脐带的去污染处理。

a)用无菌生理盐水冲洗胎盘和脐带去除肉眼可见的污物和残留血液。

b)用2％医用碘酒和75％医用酒精，或其它中高强度消毒剂对脐带，胎盘表面处理。

c)根据情况以手工分离，或专用仪器去除0.5mm左右的脐带胎盘外表面。去除过程中外表面不接 触无菌的内侧组织。(图一)

d)以上方法确保包括待处理的胎盘，脐带组织的无菌，和干细胞的最好回收率，并为后期工作减少 需处理的组织量和消化酶的使用量。

e)所储存个体常规进行组织配型(HLA)，生物学，病源微生物检测。同时建立临床用脐带，胎盘间 充质干细胞库的数据库，制备与所储存者的各类细胞，个人资料数据库，和各项报告相一致的数 据卡和条形码。

2)间充质干细胞的制备和培养。

a)使用无菌手动，或自动方法处理脐带或胎盘组织至小于1mm大小

b)进一步可使用无菌组织研磨设施处理组织至更小的颗粒

c)室温离心250g 5分钟，弃去上清，收集细胞，用DMEM清洗。再次离心和清洗。