[发明专利]重组可溶性溶血链球菌溶血素O基因、重组蛋白及其制备方法

权利要求书

1、一种具有SEQ ID NO：1所示核酸序列的重组可溶性溶血链球菌溶血素O基因。

2、一种具有SEQ ID NO：2所示氨基酸序列的重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白。

3、一种制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，包括下述步骤：

(1)从溶血链球菌中分离基因组DNA，用PCR方法得到重组可溶性溶血链球菌溶血素O cDNA；

(2)用步骤(1)获得的cDNA序列与表达质粒重组，重组子经过DNA测序验证，确定重组质粒的序列和阅读框均正确；

(3)用步骤(2)的表达载体转化表达宿主细胞；

(4)培养宿主细胞并从培养基中回收和纯化重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白。

4、根据权利要求3所述的制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述表达载体为能与重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的基因序列重组形成表达质粒的表达载体。

5、根据权利要求4所述的制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述的载体为原核表达载体。

6、根据权利要求5所述的制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述原核表达载体为PET32a(+)。

7、根据权利要求3所述的制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述的表达宿主细胞为能够表达所述表达质粒的表达宿主细胞。

8、根据权利要求3所述的制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述的表达宿主细胞为大肠杆菌Rosseta gami II(DE3)。

9、根据权利要求3所述的制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述培养基采用含抗生素基础培养基扩增培养宿主细胞，参数为：培养温度35℃-37℃，培养时间4～5h；诱导温度22℃～25℃，诱导时间14～18h；诱导物IPTG终浓度为0.2～0.5mM。

10、根据权利要求3所述的制备SEQ ID NO：2所示重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白的方法，其特征在于，所述重组可溶性溶血链球菌溶血素O蛋白通过工程菌诱导培养后离心收集菌体，超声破碎后取上清经过镍柱一步纯化得到。