[发明专利]抗衰老能力遗传检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测个体抗衰老能力遗传易感性的试剂盒，通过同时检测与抗衰老能力密切相关的内皮型一氧化氮合成酶基因(NOS3)、胞外过氧化物歧化酶基因(SOD3)上的单核苷酸多态性位点基因型来评估个体抗衰老能力遗传易感性。

背景技术

衰老是指机体成熟后已高度分化的系统走向组织紊乱以及趋异分化的过程，是许多因素共同作用的结果。主要表现为各组织器官的退行性变化，包括：组织失水、皮肤发皱、骨骼变脆、眼球水晶体物理性质改变，以及动脉硬化等等。

衰老不仅影响个人的容貌，而且更主要的是会带来许多并发症，如心脑血管、神经系统、消化系统、呼吸系统等疾病，严重危害人体健康和影响生活质量。随着世界人口老龄化程度的不断加深，衰老问题越来越严峻，据统计年龄超过65岁的人平均患有6种与衰老相关的疾病。

不同的人出现衰老症状的时间早晚不同，这主要是由于他们具有不同的抗衰老能力。抗衰老能力的大小主要由环境和遗传因素共同决定。遗传基因虽不可改变，但是及早获知自身在遗传基因上存在的患病风险，可以帮助高遗传风险人群提高重视程度，积极改变自身的饮食和生活方式，从而达到延缓衰老的目的。

NOS3基因编码的内皮型一氧化氮合成酶主要分布于冠状血管及心脏的内膜，主要功能是参与精氨酸和脯氨酸代谢，并催化生成一氧化氮(NO)。NO具有舒张血管、降低血压、抑制血管平滑肌细胞增殖等作用。当携带风险基因型时，引起NOS3基因编码的蛋白功能受损，心脏及血管中一氧化氮含量降低，易导致机体抗衰老能力下降。

SOD3是SOD同工酶的一种，与其它SOD同工酶一样，可以消除体内代谢产生的反应氧族，抵御内外环境中超氧离子的损伤，属于铜锌SOD。作为唯一可在胞外表达的SOD，其在血管系统抵御氧自由基所造成的损伤方面起到重要作用，并且能促进一氧化氮活性作用的发挥。当携带风险基因型时，引起与肝磷脂的结合能力下降，使得SOD3从组织间隙释放入血管的速度增加，在血浆中的浓度增加10倍，从而改变了SOD3在体内的分布，组织中的自由基不能及时清除，易导致机体抗衰老能力下降。

发明内容

基于内皮型一氧化氮合成酶基因(NOS3)、胞外过氧化物歧化酶基因(SOD3)上的2个SNP位点多态性可用来评估个体抗衰老能力遗传易感性的基础上，本发明提供一种检测个体抗衰老能力遗传易感性的试剂盒。

该试剂盒包括：

检测NOS3基因上G894T SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

检测SOD3基因上C760G SNP多态性基因型的特异性引物对及特异性荧光探针对；

荧光定量PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl₂溶液、反应缓冲液、去离子水等)。

本试剂盒中所述的引物对是本领域技术人员能够轻易完成设计的，并可用常规的合成技术进行合成。

本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对可用常规的探针合成技术进行合成。

本发明试剂盒的组分和含量包括：

10X荧光定量PCR反应缓冲液2μl，

25mM dNTP混合液0.2μl，

25mM MgCl2溶液1.2μl，

5units/μl Taq DNA聚合酶0.05μl，

20μM特异性引物对 每条引物各0.225μl，

10μM特异性荧光探针对 每条探针各0.25μl，

去离子水10.65μl。

本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20℃。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。

实施例1.检测试剂盒的使用

步骤1：DNA模板的抽取

用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。

步骤2：荧光定量PCR反应

使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，分别进行2次独立的荧光定量PCR反应，每个反应的体系为总体积10μl，包含浓度为20ng/μl的DNA模板2μl、1μl 10X荧光定量PCR反应缓冲液、0.1μl 25mM dNTP混合液、0.6μl 25mM MgCl₂溶液、0.025μl(5units/μl)Taq DNA聚合酶、20μM的有义引物和反义引物各0.225μl、10μM的带VIC荧光探针和带FAM荧光探针各0.25μl，去离子水5.325μl。