[发明专利]一种酶催化电导免疫传感器及其检测食源性病原体的方法

权利要求书

1.一种用于检测食源性病原体的酶催化电导免疫传感器，其特征是，它采用以下步骤制得：

(1)取常规光刻印刷法制作的微间隙阵列金电极做基片，它为叉指式双电极，正负电极均为两个梳形金电极，彼此交叉组成微间隙阵列金电极。梳形齿宽为1μm-100μm，间隙为1μm-100μm；；

(2)将所述微间隙阵列金电极进行硅烷化处理，过程是：

a.将所述微间隙阵列金电极用无水乙醇清洗三次，每次0.8min-1.2min，

b.将该微间隙阵列金电极浸入1M的NaOH溶液中28min-32min；然后超纯水清洗该微间隙阵列金电极三次，每次0.8min-1.2min，吹干；

c.将所述微间隙阵列金电极浸入含氨丙基三甲氧基硅烷5％(体积百分数)的乙醇溶液中，室温下静置23小时-25小时；再用超纯水清洗三次后吹干，即得硅烷化的微间隙阵列金电极；

(3)免疫传感器的制备步骤：

a.将所述硅烷化的微间隙阵列金电极浸入质量分数为5％的戊二醛水溶液中，室温下静置1小时；

b.取出，用超纯水清洗三次；在所述电极上滴加30μL食源性致病菌的单克隆抗体溶液，室温下静置反应1小时；所述单抗浓度为100μg/mL，该单抗溶液是将单抗溶于0.01M、pH 7.4磷酸缓冲溶液而得；

c.用超纯水清洗三次，吹干，得到酶催化电导免疫传感器。

2、一种采用权利要求1所述酶催化电导免疫传感器检测食源性致病菌的方法，其特征是，该方法采用以下步骤实现：

(1)将分析物样品或标样溶液、待测物的单抗溶液各20μL混合后滴加在所述酶催化电导免疫传感器上，室温下静置反应0.4小时-0.6小时；所用为0.01M、pH 7.4磷酸缓冲溶液；

(2)在所述传感器表面滴加20μL碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG抗体溶液，抗体浓度为10μg/mL，于室温下静置反应0.45小时-0.55小时；所述抗体溶液是将溶碱性磷酸酶标记的羊抗鼠IgG抗体溶于0.01M、pH 7.4磷酸缓冲溶液而得；

(3)将所述传感器置于银沉积溶液中，室温下静置反应8min-12min；再由该传感器获取与分析物浓度相关的电导或电阻信号；所述银沉积溶液系将1mM抗坏血酸磷酸酯、2mM AgNO₃溶于0.1M甘氨酸-NaOH缓冲溶液而得，溶液pH9.0。

3、根据权利要求2所述酶催化电导免疫传感器检测食源性病原体的方法，其特征是，所述分析物与待测物为沙门氏菌或大肠杆菌O157:H7等食源性病原体。