[发明专利]人博卡病毒实时荧光PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种实时荧光PCR检测试剂盒，特别是涉及利用实时荧光PCR技术检测人博卡病毒的试剂盒。

背景技术

冬季小儿呼吸道感染高发，其病原很复杂，除细菌、支原体、衣原体之外，很大一部分为病毒。近20年来，新发现的30多种传染病的病原中，一半以上是病毒，特别是婴幼儿急性呼吸道感染的病原中，绝大部分为病毒。尽管如此，还有相当一部分婴幼儿急性呼吸道感染的病原尚不清楚。在我国，小儿下呼吸道感染是住院治疗的首要原因，而小儿肺炎是引起小儿死亡第5位的主要原因。美国每年约有250,000儿童因下呼吸道感染住院。在临床上，有约12-39％的小儿下呼吸道感染病因不明。2005年8月，瑞典斯德哥尔摩市卡罗林斯卡大学医院的科学家运用分子病毒筛查方法，首次在儿童呼吸道分泌物中发现了这种“非常普遍、以前未知”的病原体，其基因序列与细小病毒科的牛(bovine)、犬(canine)细小病毒相近，他们将这种病毒命名为人类博卡病毒(human bocavirus，HBoV)(Tobias Allander，MarttiT.Tammi，Margareta Eriksson，et al.Cloning of a human parvovirus by molecularscreening of respiratory tract samples.PNAS.Sept.2005，vol 102，p.12891-12896)。进一步的研究发现，该病毒与儿童急性下呼吸道感染有关。一个月后，澳大利亚学者再次从急性呼吸道感染的儿童中，检获同一种病毒(Sloots TP，McErlean DJ.Speicher KE.ArdenMD.Nissen，and IM.Mackay.2006.Evidence of human coronavirus HKU1 and human bocavirusin Australian children.J.Clin.Virol.35：99-102.)。此后，荷兰、加拿大、美国、法国、澳大利亚以及亚洲的中国、日本、韩国、泰国也相继报道了这种病毒的感染情况。

HBoV在呼吸道感染的患者样本中频繁被检测到。但它在呼吸道感染中所扮演的角色还不清楚。苏格兰爱丁堡大学的Peter Simmonds博士在924例呼吸道感染者(主要来自婴幼儿患者)中进行了HBoV筛查，研究发现：HBoV感染频率仅次于呼吸道合胞病毒和腺病毒，列第三位，且感染者几乎全部是婴幼儿。耶鲁大学医学院的Jeffrey S.Kahn博士通过将无呼吸道感染症状的个体作为对照组，在儿童中进行HBoV筛查，发现在对照组个体中没有或极少发现HBov，因此认为HBoV是导致婴幼儿上、下呼吸道疾病的病原体之一。尽管在这两次研究中所涉及的人群范围较小，采用样本的婴儿都在同一年龄，样本都是在同一家医院的不同时间抽取的，但它揭示了病毒和疾病之间统计学上的关联。

在临床上，HBoV不易区别于其他呼吸道病毒，正引起许多学者、专家的密切关注，其致病性、发病机制、传播途径、感染人群、机体的免疫反应等，尚需进行更多研究。

对HBoV感染的检测意义体现在以下几个方面：(1)通过检测有(或无)呼吸道感染症状个体的HBoV感染情况，阐明呼吸道感染与HBoV联系，了解临床病征相关性。(2)简单易行的HBoV检测方法，便于在人群中进行大规模的HBoV筛查或流行病学调查，帮助我们了解这种新病毒HBoV在其他人群中的感染、传播和季节分布情况。(3)为了解这种病毒的致病性和发病机制提供了条件，对进一步研究防治措施和研制预防疫苗将起到积极作用。

目前HBoV诊断主要为血清学检查和分子生物学方法。如通过在昆虫细胞中表达特异性的病毒抗原蛋白，建立人博卡病毒特异性抗体血清酶联免疫检测技术。该技术适合于人博卡病毒感染的血清学诊断及大规模的血清流行病学调查。但是受方法本身灵敏度限制，对于病毒含量较低的患者可能会出现检测的假阴性，自身免疫性疾病患者也可能出现假阳性。此外，血清化验检测到的抗体只能代表现在或者过去有感染，而不能区别急性感染和慢性感染以及治愈者，所以不适于作为急性感染的标志。