[发明专利]一种蜡状芽孢杆菌CPU0029菌株及用它制备石斛类生物碱的方法有效
| 申请号： | 200810024502.2 | 申请日： | 2008-03-25 |
| 公开（公告）号： | CN101265459A | 公开（公告）日： | 2008-09-17 |
| 发明（设计）人： | 吕炜锋;王红兰;姚文兵;廖晨阳 | 申请（专利权）人： | 吕炜锋;王红兰 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12P17/10;C12R1/085 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 210009*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 芽孢 杆菌 cpu0029 菌株 制备 石斛 生物碱 方法 | ||
1.一种蜡状芽孢杆菌CPU0029 CCTCC M208020，其具有产生石斛类生物碱的能力。
2.一种发酵生产石斛类生物碱的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)发酵培养：以PDA培养基为种子培养基，改良PDA培养基为发酵培养基对蜡状芽孢杆菌CPU0029 CCTCC M208020进行发酵；所说的改良PDA培养基是：去皮土豆20％，葡萄糖2％，蛋白胨0.25％，硫酸铵0.25％，磷酸二氢钾0.1％，硫酸镁0.05％，氯化锰0.01％；
(2)分离纯化：将发酵液上清碱化后过滤，经氯仿或乙酸乙酯萃取，回收有机溶剂得到浸膏。
3.根据权利要求2所说的生产石斛类生物碱的方法，其特征在于，步骤(1)的培养条件为：以液体马铃薯培养基为种子培养基，30℃培养蜡状芽孢杆菌CPU0029 CCTCC M208020 12小时后；按照5-10％比例接种发酵液，在发酵培养基中，起始pH6.5-7.0，28-30℃培养48-60小时后终止发酵。
4.根据权利要求2所说的生产石斛类生物碱的方法，其特征在于，步骤(2)是：将发酵液上清碱化后过滤，滤液经过大孔树脂富集后，将洗脱液浓缩后再碱化，经氯仿或乙酸乙酯萃取，回收有机溶剂得到浸膏。
5.根据权利要求4所说的生产石斛类生物碱的方法，其特征在于，步骤(2)具体是：将发酵液离心后取上清液，用氨水碱化至pH7-11后过滤除去沉淀，滤液经过大孔树脂吸附后，再用60-90％乙醇洗脱；将洗脱液减压蒸馏浓缩后用氨水碱化，再用氯仿或乙酸乙酯萃取，回收氯仿或乙酸乙酯后得到浸膏。
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