[发明专利]油茶皂素的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及天然植物油茶中活性成分的提取制备方法，尤其涉及皂苷类物质的制备。

背景技术

油茶Camellia oleifera Abel系山茶属植物，主产我国，分布于17个省区，集中分布于我国的西南部和南部。据不完全统计我国有油茶面积336万公顷，年产油茶种子64.5万吨。仅广两就有600万亩，榨油厂多家，年产油粕近4.5万吨。据报道，油粕中含皂苷10～13％，以此计算仅广西就可年产油茶皂苷4500吨左右。然而迄今为止，国内外对油茶的研究，主要是茶油。而茶麸的研究主要是在水产养殖上的应用。

油茶皂素系自油茶种粕中提取富集得到的代表性皂苷类成分，是具有12-烯的五环三萜类皂苷。皂苷的通性之一是表面活性，这是皂苷用作表面活性剂的重要缘故，另外，有研究表明：油茶皂素对心脑血管具有保护作用，并对钉螺和淡水鱼具有毒杀作用，还有报道油茶皂素对鼠类具有抗生育功能。同时具有非常强的抗皮肤浅表感染真菌的作用。急性毒性试验结果也表明对它小鼠LD₅₀为42.66mg/kg，慢性毒性试验结果表明油茶皂素对大鼠生长发育影响不大，对肝肾功能及心、肝、脾、肺、肾等内脏器官也无明显损害；致突变实验结果确认油茶皂素无致突变作用。同时，本发明人对山茶属植物的研究始于2002年，研究发现：1、南山茶种子乙醇提取物具有非常强的抗骨质疏松作用，并确认其有效部位为具有乙酰糖基的黄酮苷；2、抗恶性肿瘤、抗生育、抗性病、抗阴道炎、抗软体动物的有效组分为油茶种子(油粕)的60％丙酮提取物，进一步研究确认有效部位均为皂苷类成分，且为12-烯-五环三萜类皂苷。

综合以上分析，对油茶皂素提取富集纯化工艺进行深入研究，就显得非常重要。有文献记载的富集、纯化皂苷的工艺，因来源和皂苷种类不同而各异。但一般都是采取浓度不同的甲醇、乙醇、丁醇及水进行提取，其中，甲醇对视力有害，而丁醇和水沸点均很高，回收不仅费时，而且对成分也有影响；富集纯化多数都要经对原皂苷组成和结构有影响的酸碱、酶、絮凝剂、超声等处理。从药用角度出发，如何保证所得油茶皂素成分组成与药效活性筛选的有效部位相一致，又不带入任何有毒有害物质，是油茶皂素提取、富集、纯化要解决的关键问题。还有采用水提法，但此法一来杂质较多，粗提取物中总皂苷含量较低，而且为提高提取物得率，需要很长的提取时间，费时费工；二来糖类、蛋白质等杂质的大量存在给后续处理工作带来很大难度。

发明内容

基于上述种种因素的考虑，本发明的目的即在于提供一种制备高纯度油茶皂素的完整技术方案。

本发明所述的油茶皂素的制备方法是：首先以榨油后的油茶油粕或种子为原料进行溶剂提取，提取溶剂是浓度为50～80％的丙酮-水溶液，料液比(g∶ml)＝1∶6～14，提取温度60～100℃，提取时间1～5h，提取次数1～5次；提取物浓缩干燥后转溶于水、过滤，滤液经D₁₀₁大孔树脂吸附后，分别用蒸馏水、浓度10～20％的乙醇溶液洗脱杂质，最后以2～5倍树脂量(ml/g)的浓度20～95％乙醇溶液洗脱，采集最后一部分洗脱液，经D₉₄₁大孔树脂柱脱色，并浓缩干燥后得油茶皂素产品。

其中，所述的提取溶剂优选浓度为50～70％的丙酮-水溶液，最优选60％；料液比(g∶ml)优选1∶9～11，最优选1∶9；提取温度优选65～75℃，最优选70℃；提取时间优选2.5～3.5h，最优选3h；提取次数优选2次。

本发明所述的上述技术方案中，大孔树脂富集处理中上样量和洗脱液与物料比是富集工艺的关键环节；洗脱速度应是“成滴而不成流”。本发明所述的油茶皂素的制备方法中，所述的D₁₀₁大孔树脂纯化步骤的洗脱是依次使用3倍树脂量(ml/g)的蒸馏水、1～2倍树脂量(ml/g)的浓度为20％的乙醇溶液洗脱杂质，然后以2.5～3倍树脂量(ml/g)的浓度60～85％乙醇溶液洗脱，采集最后一部分洗脱液。

其中，上样量优选3倍树脂量(ml/g)。

具体来讲，本发明所述的油茶皂素的制备方法包括如下步骤：

①粉碎榨油后的油茶油粕或种子原料；

②以浓度为60％的丙酮-水溶液为提取溶剂，按照料液比(g∶ml)＝1∶9，提取温度70℃，提取时间3h，提取次数2次进行提取；

③提取液浓缩干燥后转溶于水并过滤；