[发明专利]苯并咪唑化合物及其作为色谱配体的用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种苯并咪唑化合物及其作为色谱配体的用途。

背景技术

免疫球蛋白或抗体是一类极其重要的蛋白质，它存在于哺乳动物、鸟类和鱼类的各种体液中，起到对抗攻击动物的物质、细菌和病毒的动物保护剂的作用。免疫球蛋白通常存在于动物的血液、乳液和唾液以及其它体液和分泌物中。

现已在有关人类和兽类诊断、健康护理和治疗部门的多种不同应用中开发免疫球蛋白所具有的生物活性。

所有上文所提及的免疫球蛋白的应用都需要在一定程度上将抗体从对粗原材料中分离，但各类应用对于抗体产物的最终纯度和可允许的成本都有其自身不同的需要。

一般说来，存在许多种可用于分离免疫球蛋白从而得到具有多种最终纯度、产率和成本的产物的不同方法。

分离免疫球蛋白的传统方法是基于选择性可逆沉淀包含免疫球蛋白的蛋白质片断，同时使其它类别的蛋白质留在溶液中。典型的沉淀剂为乙醇、聚乙二醇、易溶(lyotropic)(抗离液(anti-chaotropic))盐(诸如硫酸铵和磷酸钾)，以及辛酸(caprylic acid)。

典型地，这些沉淀方法将提供极其不纯的产物，同时还费时费力。此外，将沉淀剂加到原材料中将使得难以将上清液用于其它目的并且会产生处理的问题。当论及从(例如)乳清和血浆中大规模纯化免疫球蛋白时，上述弊端将尤其明显。

离子交换色谱法是另一种众所周知的通常用于分离免疫球蛋白的蛋白质分级分离方法。然而，由于为确保抗体有效结合以及不同免疫球蛋白的不同等电点所需的离子强度和pH值存在限制，故这种方法通常并不适用。

蛋白质A和蛋白质G亲和色谱法主要由于使用简便性和所获得的高纯度而成为分离和纯化免疫球蛋白、尤其分离单克隆抗体的极其流行和普遍的方法。尽管十分流行，但普遍认为蛋白质A和蛋白质G会给用户带来若干问题，其中包括：极高的成本、不同单克隆抗体(尤其小鼠IgG₁)的变化的结合效率、蛋白质A/蛋白质G漏入产物中和基质于典型清洗溶液(例如，1M的氢氧化钠)中的低稳定性。上述每个缺点都会在个别应用中引起特定结果，包括可忽略的到极其严重的并且超限的结果。

因此，需要分离和纯化免疫球蛋白的新颖方法。

发明内容

本发明是基于一种发现，即，可将通过使某些经取代苯并咪唑配体与固相材料连接所形成的固相基质用于从多种不同原材料中分离和/或纯化不同种类免疫球蛋白的方法中，这将提供高效率并且对于结合过程中使用少量盐或不使用盐(尤其易溶盐)以及对于结合多种免疫球蛋白的能力而言，提供特殊优势。此外，这些基质对于在NaOH中的稳定性也特别有益，这一益处在使用后使固相基质再生时尤为明显。

本发明的一个实施例是针对一种用于从含有一种或一种以上免疫球蛋白的溶液中分离免疫球蛋白的方法，其包含：a)使所述含有一种或一种以上免疫球蛋白的溶液与通式M-SP-L的固相基质接触；b)将结合有免疫球蛋白的固相基质与所述溶液分离；c)视情况洗涤所述固相基质；和d)使所述固相基质与洗脱液接触以便将所述一种或一种以上免疫球蛋白从所述固相基质释放。

M表示基质主链，SP表示间隔基，并且L表示由结构式(I)所示的配体：

或其互变异构体，其中：

R₁为-Z-N(R₃)₂、-Z-SR₃或-Z-OR₃；

R₂为-H、-卤素(例如，-F、-Cl、-Br或-I)、-OR₄、-NH₂、-烷基、-NO₂、-SO₃H、-N(R₃)C(O)N(R₃)₂，

或

R₃在每次出现时独立地为-H或视情况经取代的烷基；

R₄在每次出现时独立地为-H或视情况经取代的烷基；

R₅在每次出现时独立地为-H或视情况经取代的烷基；

Z为单键、视情况经取代的亚烷基、视情况经取代的亚烯基或视情况经取代的亚炔基；

n为0到4的整数；

条件是L不为2-巯基-5-硝基-苯并咪唑、2-氨基-苯并咪唑、2-巯基苯并咪唑和2-氨甲基-苯并咪唑。

本发明另外提供一种包含具有多个官能团的官能化基质主链的固相基质，由式M-SP-L表示。