[发明专利]不使用蛋制备流感病毒疫苗

权利要求书

1.一种制备用于制造疫苗的流感种病毒的方法，所述方法包括以下步骤： (i)用从患者直接获得的或来自原代分离物的流感病毒感染细胞系；(ii)将步骤(i) 中所得受感染细胞系的病毒进行至少一次传代；和(iii)对步骤(ii)的受感染细胞 进行培养以制备用作种病毒的流感病毒，其中，步骤(i)中所用的流感病毒是乙 型流感病毒或是甲型流感病毒的H1毒株或H3毒株。

2.一种制备用于制造疫苗的流感种病毒的方法，所述方法包括以下步骤： (i)用从患者直接获得的或来自原代分离物的流感病毒感染细胞系；(ii)制备由步 骤(i)中所得受感染细胞系产生的流感病毒的至少一个病毒RNA区段的cDNA， 并在反向遗传学方法中采用该cDNA制备新的流感病毒，该新的流感病毒中至 少一个病毒RNA区段与步骤(i)的流感病毒相同；(iii)用所述新的流感病毒感染 细胞系，然后该培养细胞系以制备用作种病毒的新的流感病毒。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(ii)中的传代是通过与步 骤(i)中所用细胞类型相同的细胞进行的。

4.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，步骤(i)、(ii)或(iii)都 不涉及流感病毒在蛋中培养或传代。

5.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞系是非人哺 乳动物细胞系。

6.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞系是MDCK 细胞系。

7.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，对所述种病毒进行测 序。

8.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，用所述种病毒引发抗 血清。

9.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，用所述种病毒制备工 作种子批。

10.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，用所述种病毒制 造疫苗。

11.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，所述种病毒基因 组没有PR/8/34区段。

12.如前述权利要求任一项所述的方法，其特征在于，所述种病毒含有 血凝素，该血凝素具有与含Sia(α2，3)Gal末端二糖的寡糖相比，更偏向于结合 含Sia(α2，6)Gal末端二糖的寡糖的结合偏好。

13.一种制备用于制造疫苗的流感病毒的方法，所述方法包括以下步 骤：(i)获得在群体中流通的流感病毒或者包含血凝素的流感病毒，该血凝素具 有在群体中流通的流感病毒的代表性抗原性；(ii)用步骤(i)获得的流感病毒感染 细胞系；(iii)将由步骤(ii)受感染细胞系获得的病毒进行至少一次传代，以得到 种株；和(iv)培养步骤(iii)的种株以产生流感病毒。

14.一种制备用于制造疫苗的流感病毒的方法，所述方法包括以下步 骤：(i)获得在群体中流通的流感病毒或者包含血凝素的流感病毒，该血凝素具 有在群体中流通的流感病毒的代表性抗原性；(ii)用步骤(i)获得的流感病毒感染 细胞系；(iii)制备由步骤(i)中所得受感染细胞系产生的流感病毒的至少一个病 毒RNA区段的cDNA，并在反向遗传学方法中采用该cDNA制备流感种病毒， 该流感种病毒中至少一个病毒RNA区段与步骤(i)的流感病毒相同；和(iv)用所 述流感种病毒感染细胞系，然后培养来自步骤(iii)的经传代的细胞系以产生流 感病毒。

15.一种制备流感病毒疫苗的方法，该方法在如权利要求13或14所述 的步骤(i)-(iv)之后包括以下步骤：(v)处理步骤(iv)所得病毒以制备疫苗。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，所述步骤(v)涉及灭活所 述病毒。

17.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述疫苗是全病毒颗粒 疫苗。

18.如权利要求16所述的方法，其特征在于，所述疫苗是分裂病毒颗 粒疫苗。