[发明专利]用于体内转染肠细胞的非病毒组合物和方法

权利要求书

1.包含基于壳聚糖的纳米微粒的组合物，所述基于壳聚糖的纳米颗粒包含(i)具有3kDa至250kDa的平均分子量的多个壳聚糖聚合物和(ii)治疗性构建体，其中所述治疗性构建体包含可操作连接到在肠粘膜细胞内有功能的表达调控区的治疗性核酸，其中所述治疗性核酸表达于所述肠粘膜细胞时能够发挥治疗作用，以及其中所述基于壳聚糖的纳米微粒能够引起所述治疗性核酸在肠粘膜长于4天的表达。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒能够引起所述治疗性核酸在肠粘膜长于14天的表达。

3.如权利要求1所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒能够引起所述治疗性核酸在肠粘膜长于60天的表达。

4.如权利要求1所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒能够引起所述治疗性核酸的表达产物的系统水平的增加。

5.如权利要求1所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒是低分子量壳聚糖纳米颗粒，其中所述多个壳聚糖聚合物具有小于25kDa的平均分子量。

6.如权利要求5所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒具有10:1至90:1的N:P比。

7.如权利要求5所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒具有小于225nm的直径。

8.如权利要求1所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒是高分子量壳聚糖纳米颗粒，其中所述多个壳聚糖聚合物具有大于25kDa的平均分子量。

9.如权利要求8所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒具有2:1至40:1的N:P比。

10.如权利要求8所述的组合物，其中所述基于壳聚糖的纳米颗粒具有小于225nm的直径。

11.如权利要求1所述的组合物，其中所述治疗性核酸编码治疗性蛋白。

12.如权利要求1所述的组合物，其中所述表达调控区包含肠特异的调控序列。

13.如权利要求1所述的组合物，其中所述治疗性构建体还包含整合序列。

14.如权利要求13所述的组合物，还包含非治疗性构建体，其中所述非治疗性构建体包含编码整合元件的核酸序列，所述整合元件可操作连接到在肠粘膜前体细胞内有功能的第二表达调控区，并且其中所述第二表达调控区和所述可操作连接到所述治疗性核酸的表达调控区可以相同或不同。

15.包含基于壳聚糖的纳米颗粒的组合物，所述基于壳聚糖的纳米颗粒包含(i)多个壳聚糖聚合物和(ii)非治疗性构建体，其中所述非治疗性构建体包含编码可操作连接到表达调控区的整合元件的核酸，所述表达调控区在肠粘膜前体细胞内有功能。

16.在肠粘膜细胞表达治疗性核酸的方法，所述方法包括将肠粘膜与权利要求1所述的组合物接触，由此将所述治疗性核酸表达于所述肠粘膜的肠粘膜细胞。

17.如权利要求16所述的方法，还包括将所述肠粘膜与权利要求15所述的组合物接触。

18.在肠粘膜细胞表达治疗性核酸的方法，包括将肠粘膜与权利要求14所述的组合物接触，由此将所述治疗性核酸表达于所述肠粘膜的肠粘膜细胞。

19.引起治疗性核酸的表达产物的系统水平增加的方法，包括将肠粘膜与权利要求4所述的组合物接触，由此将所述治疗性核酸表达于所述肠粘膜的肠粘膜细胞。