[发明专利]疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种制备疫苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)利用对NNV具感受性的鱼类细胞株培养NNV病毒，以获得含有所述病毒的上清液；

(b)将所述的上清液以去活化药剂处理，得到去活化疫苗；所述的去活化药剂是甲醛水溶液或2-溴乙胺(binary ethyleneimine)，以及

(c)将所述的去活化疫苗经纳米化包埋程序，形成纳米化包埋的去活化疫苗，所述的纳米化去活化疫苗的病毒浓度在10⁵TCID50/ml以上。

2.根据权利要求1所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的纳米化去活化疫苗的颗粒大小在20至500nm之间。

3.根据权利要求1所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的对NNV具感受性的鱼类细胞株是GF-1、SSN-1、E-11、GB3、GF、GL、SISE、GS、SAF1或GL-av。

4.根据权利要求1所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的NNV病毒是自所有罹患神经坏死症鱼体分离出来的NNV分离株的任意一种。

5.根据权利要求1所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的NNV病毒是RGNNV、SJNNV、TPNNV、BFNNV、FEV、DGNNV、GGNNV、G9410YA、G9508KS或HG00GD。

6.根据权利要求1所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的纳米化去活化疫苗为浸泡式疫苗，以浸泡的方式进行免疫。

7.根据权利要求6所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的浸泡的时间为30至60分钟之间。

8.根据权利要求1所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的纳米去活化疫苗用于免疫水生动物。

9.根据权利要求8所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的水生动物是鱼类或虾类或蟹类。

10.根据权利要求9所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的鱼类是金目鲈(barramundi，Lates Calcarifer)、海鲈(sea bass， Dicentrarchus labrax)、鲆鱼(turbot，Scophthalmus maximus)、红点石斑(red-spotted grouper，Epinephelus  akaara)条纹鲹(striped jack，Pseudocaranx dentex)、大西洋比目鱼(Atlantic halibut，Hippoglossus hippoglossus)、虎河鲀(tiger puffer，Takifugu rubripes)、日本鲽鱼(Japanese flounder，Opegnathus fasciatus Temminck and Schlegel)、条斑星鲽(barfin flounder，Versaper moseri)、红甘鲹(purplish amberjack，Seriola dumerili)、七带石斑(sevenband grouper，Epinephelus septemfasciatus)或日本真鲈(Japanese sea bass，Lateolabrax japonicus)。

11.根据权利要求9所述的制备疫苗的方法，其特征在于：所述的鱼类的鱼龄小于或等于1个月。

12.一种疫苗，其是由权利要求1所述的方法制备得到，其特征在于：所述的疫苗的颗粒大小在20至500nm之间。

13.根据权利要求12所述的疫苗，其特征在于：所述的制备疫苗用的病毒来自罹患神经坏死症鱼体分离出来的NNV分离株。

14.根据权利要求13所述的疫苗，其特征在于：所述的NNV分离株是RGNNV、SJNNV、TPNNV、BFNNV、FEV、DGNNV、GGNNV、G9410YA、G9508KS或HG00GD。

15.根据权利要求12所述的疫苗，其特征在于：所述的疫苗的病毒浓度在10⁵TCID50/ml以上。

16.根据权利要求12所述的疫苗，其特征在于：所述的疫苗为浸泡式疫苗，以浸泡的方式进行免疫。